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目的本研究以四逆散加清热解毒、除痰利湿中药(小飞扬草,珍珠草和法半夏等),采用H22和S180小鼠移植瘤模型,运用细胞学和免疫组化等研究技术,比较观察加味四逆散不同浓度的抑瘤效果及对免疫功能影响,探讨加味四逆散抗肝癌的作用机理。同时,观察加味四逆散治疗中晚期原发性肝癌的临床疗效。方法按照纳入、排除标准收集使用加味四逆散治疗的中晚期原发性肝癌患者,采用肝癌患者生命质量量表(QOL-Lc2.0),收集患者的一般信息、生活行为、四诊、辨证分型及实验室指标,采用EpiData3.0统计软件包建立数据库,进行数据的录入,并进行数据的逻辑校对,发现输入错误立即根据观察表进行更正,保证数据的完整和准确,数据校对无误后导出为SPSS文件；运用SPSS17.0分析软件进行分析,生存时间,按LifeTables寿命表法及生存曲线表述;瘤体变化,按UICC实体瘤评价标准判断疗效。建立小鼠H22肝癌实体瘤模型和腹水瘤模型,分别灌服高、中低浓度加味四逆散煎剂(50、25、12.5g/kg/d),腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-FU)(20mg/kg/d)做阳性对照。在H22肝癌实体瘤模型各组给药8天后检测各组的瘤重、体重、脾脏指数和胸腺指数,MTT法测定各组自然杀伤细胞(NK)和T淋巴细胞增殖的活性,ELISA法测定各组血清白细胞介素-2(IL-2)的活性、TNF-α和VEGF含量,免疫组化方法检测肿瘤组织的微血管密度(MVD)。在H22肝癌腹水瘤模型观察到模型组出现死亡的时候停止给药,观察各组的生存时间。建立小鼠S180肉瘤实体瘤模型,灌服加味四逆散中剂量(25g/kg/d),连续10天后,测定各组瘤重。H22腹水瘤小鼠的生存时间分析采用SPSS17.0统计软件Kaplan-Meier法。其他数据处理采用One-Way ANOVA法。结果临床研究结果：共纳入35例原发性肝癌患者,其中Ⅲ期病人15例(43%),Ⅳ期病人20例(57%)。经过加味四逆散治疗后,患者最长生存时间1085天,最短生存时间39天。其中半年生存率40%(14人),1年生存率26%(9人),2年生存率14.2%(5人),3年生存率2.8%(1人),中位生存期5.5个月,至今存活病例数1人。提示加味四逆散对延长原发性肝癌患者的中位生存时间、生存期有一定疗效。在35例患者中没有CR的患者,4例(11.4%)PR,17例(48.6%)SD,14例(40%)PD,提示加味四逆散对控制中晚期原发性肝癌的瘤体有一定的效果。治疗4周后、治疗8周后与治疗前比较,患者在躯体功能纬度、心理功能纬度、症状功能纬度、社会功能纬度及QOL-LC总评分等方面均有提高(均P<0.05),提示加味四逆散治疗后患者并在躯体、心理、症状、社会功能及总体生活质量方面均较治疗前有明显改善。治疗8周后与治疗4周后比较,患者在躯体功能纬度评分方面降低(P<0.05)、在心理功能纬度、症状功能纬度、社会功能纬度及QOL-LC总评分等方面无差异(均P>0.05),提示加味四逆散对长期改善患者的躯体功能疗效不太理想,但在心理、症状、社会功能及总体生活质量方面,其改善作用持久。治疗4周后、治疗8周后与治疗前比较,肝功能Child-Pugh评分减少(均P<0.05),提示加味四逆散可改善患者肝功能情况。治疗8周后与治疗4周后比较,Child-Pugh评分提高(P<0.05),肝功能下降,提示加味四逆散改善肝功能的远期疗效不甚理想。实验研究结果：①加味四逆散对延长荷瘤小鼠生存时间有一定的作用,特别是高剂量加味四逆散可明显提高生存时间。②加味四逆散有明显增加荷瘤小鼠体重的作用,特别是加味四逆散中剂量组和低剂量。③加味四逆散随剂量增加有一定抑瘤的作用；对H22肝癌小鼠的瘤体,高剂量加味四逆散的抑瘤率达18.6%(P<0.05)；对S180肝癌小鼠实体瘤的瘤体,高、中剂量加味四逆散的抑瘤率达19.9%、12.9%(P<0.05)。④加味四逆散高、低剂量组则刺激腋下接种H22小鼠胸腺增大(P<0.05)；腋下接种S180,加味四逆散可增加荷瘤小鼠的脾脏指数(P<0.05),而5-FU的治疗造成了小鼠脾脏和胸都明显萎缩(P<0.01)；同时,加味四逆散显著提高IL-2活性(P<0.05),提高荷瘤小鼠T淋巴细胞活性(P<0.05),NK细胞增殖活性(P<0.05),提示加味四逆散的抗肿瘤作用可能与其提高机体免疫功能相关。⑤加味四逆散能显著降低荷瘤小鼠血清中的VEGF浓度(P<0.05),在肿瘤组织中观察到细胞核固缩深染、血管数量明显减少,提示加味四逆散有抑制瘤组织中的血管生成作用。另外,加味四逆散作用的肿瘤组织癌细胞间质变多,细胞与细胞间的黏附增强,提示其可抑制肿瘤的浸润和转移。⑥加味四逆散可降低荷瘤小鼠血清TNF-α浓度(P<0.05),这可能是其保护肝功能的作用机制。结论①加味四逆散治疗原发性肝癌,中位生存期达5.5个月,对控制瘤体有一定效果；可提高患者生存质量,改善患者的症状,改善肝功能加味四逆散对延长原发性肝癌患者生存期、中位生存时间及控制瘤体有一定效果,但由于中晚期肝癌患者病情危重,肝功能衰竭,单纯使用加味四逆散难以维持改善肝功能的长期疗效。②加味四逆散对H22、S180肝癌小鼠瘤体有明显抑瘤效果；提高荷瘤小鼠免疫功能,降低VEGF浓度,推测抑制瘤组织中的血管生成作用可能是其抗肝癌的作用机制之一；同时,该方可降低TNF-α浓度,发挥保护肝功能的作用；另外,可增加细胞与细胞间的黏附,提示其可抑制肿瘤的浸润和转移。