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目的观察紫云英苷(Astragalin,AG)对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠生精功能损伤的保护作用,以及探讨紫云英苷对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠生精功能损伤保护作用的机制。方法1.观察紫云英苷对糖尿病小鼠生精功能损伤的保护作用1整体水平:利用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)构建糖尿病小鼠模型,给予紫云英苷治疗(3.3 mg/kg,10 mg/kg和30 mg/kg)和氯米芬治疗(5 mg/kg)8周,并且在治疗期间检测糖尿病小鼠不同时间段血糖值和末期糖化血红蛋白水平。治疗结束后,利用血球计数细胞法检测紫云英苷对糖尿病小鼠精子参数的影响;利用分析天平检测紫云英苷对糖尿病小鼠生殖脏器重量和脏器系数(睾丸、附睾以及精囊腺)的影响;采用分光光度法检测紫云英苷对糖尿病小鼠睾丸组织中碱性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)的影响;采用组织病理学方法HE和PAS染色观察紫云英苷对糖尿病小鼠睾丸组织结构变化以及生精小管基膜改变的影响。2细胞水平:利用高糖诱导的GC-1精原细胞损伤模型,通过AG(10μg/mL)干预24小时后,采用CCK8法和流式细胞术检测紫云英苷对高糖诱导GC-1精原细胞存活率和凋亡率的情况。2.探讨紫云英苷对糖尿病小鼠生精功能损伤的保护作用机制1整体水平:利用免疫组织化学法观察紫云英苷对糖尿病小鼠睾丸组织中NF-κB表达情况;采用Western blot方法检测紫云英苷对糖尿病小鼠睾丸组织中TNF-α、NF-κB和iNOS蛋白表达情况。2细胞水平:利用Western blot检测紫云英苷对高糖诱导GC-1精原细胞中IKK-β、p-IKK-β、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB、p-NF-κB蛋白含量的影响;利用免疫荧光化学法检测紫云英苷对高糖诱导GC-1精原细胞中NF-κB p65核移位的情况。结果1.观察紫云英苷对糖尿病小鼠生精功能损伤的保护作用1整体水平:与糖尿病组比较,紫云英苷(30 mg/kg)组小鼠血糖值和糖化血红蛋白水平在治疗末期降低(P<0.05),但未达到正常范围;与糖尿病组比较,紫云英苷(30 mg/kg)组显著提高糖尿病小鼠精子参数(精子数目、活力、活率以及每日生精量)(P<0.01),显著降低精子畸形率(P<0.01);与糖尿病组比较,紫云英苷(30 mg/kg)可显著增加糖尿病小鼠睾丸组织中睾丸酶ALP活性(P<0.01)和ACP活性(P<0.01);与糖尿病组比较,紫云英苷(30 mg/kg)组可明显减轻糖尿病小鼠睾丸组织病理结构改变和恢复生精小管基膜结构;2细胞水平:与高糖组比较,紫云英苷(10μg/mL)组可显著增加GC-1精原细胞存活率和降低凋亡率(P<0.01);2.探讨紫云英苷对糖尿病小鼠生精功能损伤保护作用的机制1整体水平:免疫组化实验结果显示,紫云英苷(30 mg/kg)能够减少糖尿病小鼠睾丸组织生精细胞中NF-κB p65表达;同时,Western blot结果显示,与糖尿病组对比,紫云英苷(30 mg/kg)组可显著降低TNF-α、NF-κB p65和iNOS蛋白含量在糖尿病小鼠睾丸组织的表达(P<0.01)。2细胞水平:与高糖组相比较,紫云英苷(10μg/mL)组下调高糖诱导的GC-1精原细胞中p-IKKβ(P<0.05)、p-IκBα(P<0.01)、p-NF-κB p65(P<0.05)蛋白表达;免疫荧光实验结果显示,与高糖组比较,紫云英苷(10μg/mL)组可抑制NF-κB p65向细胞核内迁移。结论1.紫云英苷对糖尿病小鼠生精功能损伤具有保护作用。2.紫云英苷对糖尿病小鼠生精功能损伤的保护作用与抑制精原细胞中NF-κB信号通路有关。