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甘油磷脂酰胆碱(L-alpha-glycerophosphorylcholine,简称GPC),由甘油、胆碱和磷酸盐三部分组成,是人体内存在的天然水溶性磷脂代谢产物,是大脑中神经递质前体物乙酰胆碱和磷脂酰胆碱合成的胆碱源。作为磷脂的改性产品,GPC具有非常重要的医药和保健价值。对各类人群均适用,特别是对于治疗老年人的各种脑部疾病非常有效,在治疗老年痴呆症以及老年人脑中风等方面效果显著。但是,目前国内GPC的生产厂家较少,且使用的制备方法主要是化学制备法,而化学制备法存在着收率低、有机试剂大量使用等诸多的不足。因此,如何实现GPC的绿色酶法制备、制备放大以及绿色纯化成为目前研究的热点。本研究针对传统的GPC制备以及纯化方法中有机溶剂大量使用造成的环境污染及高成本等问题,初步建立了一套绿色的GPC酶法制备和纯化方法。首先,利用本实验自制的黑曲霉展示全细胞催化剂AN-CALB在非水相体系中乙醇醇解PC25制备GPC。在2m L反应体系中,对主要影响因素:底物摩尔比、底物浓度、水添加量、反应介质、全细胞催化剂的浓度、反应温度等进行研究,获得最适的反应条件:底物摩尔比(乙醇∶PC25)为7∶1;底物(PC25)浓度为24 mg/mL;水添加量为60%([w水/w底物]%);反应介质为异辛烷;全细胞催化剂AN-CALB的浓度为20mg/mL;反应温度为60℃。在最适反应条件的基础下,发现,反应经过8h后,PC的转化率达到98%,GPC的产率达到94%。使用混合溶剂(叔丁醇∶甲醇=4∶3)回收反应后的GPC,然后再将全细胞催化剂继续用到下一次的反应中,连续反应10次后,PC的转化率仍然能达到96%,GPC的产率仍然能达到85%,全细胞催化剂AN-CALB表现出较好的操作稳定性。在2m L体系的最适反应条件基础上,将反应逐步放大到1L和15L。1L反应的时间进程曲线显示,经过15h反应后PC的转化率达到94%,GPC的产率达到85%。15L反应的时间进程曲线显示,经过8h反应后PC的转化率达到97%,GPC的产率达到81%。全细胞催化剂AN-CALB在反应放大过程中仍然具有较高的催化活性,反应放大的重现性较好。用混合溶剂提取反应后的GPC。除第1批次反应的GPC提取率较低外,第2到第5批次反应的GPC提取率均高于80%,GPC的浓度均大于0.3g/L,获得较好的提取结果。采用硅胶柱层析-活性炭脱色联用的方法对GPC粗液进行纯化,通过研究影响硅胶柱层析纯化效果的主要因素,确定了硅胶柱层析纯化的最适条件:洗脱流速1mL/min;上样浓度2.8mg/m L;上样体积200mL;洗脱剂100%甲醇;硅胶添加量100g。将经过硅胶柱层析纯化后的GPC水溶液用活性炭进行脱色纯化,脱色后得到澄清的GPC水溶液。采用冷冻干燥的方法除去GPC水溶液中的水,获得GPC固体,然后取一定量的固体GPC溶于甲醇中,用HPLC-ELSD进行检测,测得GPC的最终纯度为65.7%。