肿瘤血管为肿瘤发生、发展提供足够的氧分和营养，靶向肿瘤血管新生可以达到抑制肿瘤生长的作用。血管内皮生长因子（VEGF）是一类能够调节血管生成的因子，它们需与其受体结合从而发挥生物学效应，VEGFR2是转导VEGF血管新生信号的关键受体，参与调控VEGF通路介导的细胞增殖、细胞存活、迁移和血管形成等。并且，VEGFR2不仅在肿瘤相关的内皮细胞上表达，而且还可能在某些肿瘤细胞，尤其是肿瘤干细胞上也高表达，因此选择性地阻断VEGFR2信号通路可以抑制肿瘤血管的形成和肿瘤细胞的生长。基于以上事实，山东步长神州制药有限公司研发了抗VEGFR2全人化单克隆抗体BC001，我们将从体外实验、小鼠肿瘤模型实验探讨药物的抗血管新生和抑制肿瘤生长的作用。首先，我们利用人脐血管内皮细胞（HUVEC）的细胞活性实验、细胞划痕实验，Transwell迁移实验、血管状结构形成实验分别研究BC001对血管内皮细胞的增殖、侵袭、迁移和血管状结构形成的影响，从我们的结果中可以发现BC001能够抑制血管内皮细胞的血管内皮细胞的增殖、侵袭、迁移和血管状结构形成，说明该抗体药物在体外能够抑制血管的形成。此外，我们查阅文献发现，VEGFR2在肿瘤干细胞上高表达，影响着肿瘤干细胞的活性、自我更新能力、致瘤性，并且提示VEGFR2也参与了肿瘤干细胞向内皮细胞转分化过程，因此我们建立了胶质瘤干细胞向血管内皮细胞转分化模型，研究BC001对胶质瘤干细胞向血管内皮细胞转分化的干预作用。体内实验，我们首先根据概念验证原则(proof-of-concept)，完成了抗鼠VEGFR2人源化单克隆抗体对鼠B16F10细胞的皮下移植瘤生长的影响实验，实验结果证实抗鼠VEGFR2人源化单克隆抗体能够很好的抑制B16F10皮下移植瘤的生长。随后我们进行了BC001对人结肠癌HCT116细胞的裸鼠的皮下移植瘤实验，该部分数据显示BC001可以一定程度的抑制肿瘤生长。并且我们对实验中空白对照组、贝伐珠单抗组和BC00110mg/kg组的瘤块进行HE染色和组织免疫组化(Ki67，Caspase3，TUNEL，CD31，VEGFR2)，分别从增殖、凋亡，血管密度和VEGFR2表达量等方面考察BC001对HCT116细胞的皮下移植瘤生长的影响。最后我们还观察到BC001能够明显抑制胃癌细胞BGC823的皮下移植瘤生长。基于以上所有实验结果，我们认为抗VEGFR2全人化单克隆抗体能够抑制肿瘤血管的形成和肿瘤的生长。核黄素是人体新陈代谢酶系统的重要组成部分，参与生物机体的生物氧化反应和能量代谢，与人体内碳水化合物、脂肪及氨基酸代谢也有着密切的关系。但是核黄素在体内储存量小，生物利用度低，半衰期短，极易造成各种核黄素缺乏症。月桂酸核黄素为长效核黄素，它可以在体内缓慢释放出游离的核黄素，发挥长效的药理作用，但是具体明确的月桂酸核黄素在体内转运机制尚未有研究报道。而Caco-2细胞模型已经广泛地被认为是良好的体外模型，来进行药物跨膜转运机制的研究。所以本实验首先建立Caco-2细胞转运模型，考察月桂酸核黄素在Caco-2细胞模型上转运机制，阐明月桂酸核黄素的体内转运方式。通过月桂酸核黄素在Caco-2细胞模型上双向转运实验，我们可以得知，月桂酸核黄素(10,25,50mmol/L)能以原型药物通过Caco-2细胞模型，并且表观渗透系数Papp在（1.0-10）×10-6之间，说明月桂酸核黄素在体内可以以原型药物被转运，然后发挥药理作用，并且可能是通过主动转运的方式。由于月桂酸核黄素在Caco-2细胞模型上的外排系数EfR在1.5-2.5之间，暗示月桂酸核黄素转运过程中可能存在外排机制。月桂酸核黄素自开发以来，一直被用于治疗因核黄素缺乏引起的各种综合症。最近在临床上，研究者们发现月桂酸核黄素对肿瘤化疗、放疗后引起的口腔和消化道黏膜炎有很好的治疗作用，但其细胞水平上的药效学研究仍未得到证实。本实验选用人肺成纤维细胞（Helf），利用顺铂、60Co-γ照射建立化疗、放疗引起的细胞损伤模型，从而研究月桂酸核黄素对化疗药物、放射造成的细胞损伤的保护及治疗作用。实验结果显示，月桂酸核黄素对化疗或放疗造成的Helf细胞损伤有良好的保护或治疗作用，且与核黄素相比，这种保护或治疗作用更强。