论文部分内容阅读
目的：将针对survivin基因的两段RNA干扰序列(pGenesil-8-siRNA-survivin2，pGenesil-8-siRNA-survivin10)分别转染及共转染人乳腺癌细胞MCF-7，研究其沉默survivin基因的表达及其诱导肿瘤细胞凋亡的效应。
方法：以survivin基因为靶点，应用脂质体转染技术，将构建的两段RNA干扰序列分别转染及共转染人乳腺癌细胞MCF-7，通过激光共聚焦显微镜观察转染效率；采用real-time PCR方法检测细胞内survivin基因mRNA水平的表达变化；利用Western-blotting检测细胞内survivin蛋白表达变化；应用Annexin-V-cy5/7AAD双染后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率；MTT法检测细胞增殖效应。
结果：体外细胞模型研究结果表明：①转染pGenesil-8-siRNA-survivin2组，pGenesil-8-siRNA-survivin10组及共转染组(pGenesil-8-siR-NA-survivin2/survivin10)与对照组相比，survivin基因的mRNA表达水平显著降低，其中Pg-8-EGFP-survivin2/survivin10组survivin基因的mRNA表达水平较其他组降低最多，pGenesil-8-siRNA-survivin2组与pGenesil-8-siRNA-survivin10组之间无显著差异；②转染pGenesil-8-siRNA-survivin2组或pGenesil-8-siRNA-survivin10组以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10组survivin基因的蛋白表达水平显著降低，其中pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10组survivin基因的蛋白表达水平较其他组降低最多，pGenesil-8-siRNA-survivin2组与pGenesil-8-siRNA-survivin10组比较无显著差异；③转染pGenesil-8-siRNA-survivin2组或pGenesil-8-siRNA-sur-vivin10组以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10组人肿瘤细胞凋亡率显著增加，其中Pg-8-EGFP-survivin2/survivin10组人肿瘤细胞凋亡率增加最多，pGenesil-8-survivin2组与pGenesil-8-survivin10组比较无显著差异；④pGenesil-8-siRNA-sur-vivin2组或pGenesil-8-siRNA-survivin10组以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/sur-vivin10组可抑制人肿瘤细胞增殖，其中pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10组的抑制作用最强。
结论：针对survivin基因的两段RNA干扰序列能够沉默MCF-7 survivin基因的表达，增加肿瘤细胞的凋亡同时抑制肿瘤细胞的增殖，其中共转染两段不同RNA干扰序列的实验组具有显著的抗瘤效应，表明干扰RNA能够降低survivin基因的表达水平，并且抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。