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盐肤木(Rhus chinensis)是漆树科(Anacardiaceae),盐肤木属(Rhus)落叶小乔木,它作为中国经济价值极高的树种,可供制药、榨油、观赏和做工业染料的原料等。目前对盐肤木的研究主要在其成分及药用价值、形态特征、栽培方法和技术等方面,而有关其体内防御酶的研究很少。苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase, PAL)是苯丙烷代谢途径中的关键酶和限速酶,植物的初级代谢和苯丙烷类代谢就是被它所连接,PAL是与植物的抗逆性密切相关的酶,是一种防御酶。本论文以盐肤木为研究材料,对其PAL基因进行分子克隆,构建重组表达载体,经原核表达系统得到其重组蛋白,进一步对其性质和功能进行研究。主要研究结果如下：1.本研究提取得到的盐肤木总RNA,28SrRNA和18SrRNA的电泳条带清晰,没有拖尾现象,完整性很好,能用于后续分子克隆等实验。2.首次得到盐肤木PAL基因(RcPAL)的ORF序列。RcPAL基因全长cDNA的长度为2491bp,其中2124bp的ORF编码707个氨基酸,5’端有一段197bp的非编码区(5’UTR),3’端有一个170bp的非编码区(3’UTR)。RcPAL全长cDNA序列是漆树科中首次被报道的。3.构建成功重组表达载体pET-28a-PAL,长度约为7500bp。在大肠杆菌中,此载体被诱导后得到约77kDa的重组蛋白。经50%咪唑洗脱液得到纯度及酶活性最高的RcPAL酶液。4. RcPAL的最适pH为9.0,最适温度为45℃,Ea为8.03kcal/mol。其动力学曲线呈双曲线型,底物L-苯丙氨酸浓度增大,RcPAL的酶活性也增强,并从底物浓度为20mM开始酶活性趋于平稳。RcPAL的Km为7.9mM, Kcat为52.31s-1。5.对3个重要位点进行定点突变,成功得到3个突变体,Phe126→His126(TTC→CAC)、Ser194→Trp194(TTC→CAC)、Asp374→Ala374(TTC→CAC),突变体M1、M2、M3的PAL酶活性为对照样品的25%、2%、20%,证明这3个位点是酶活性位点。将Phe126突变为His126后,突变体M1的PAL相对酶活性仅为对照的25%,而突变体M1的TAL相对酶活性却为对照的22倍,证明Phe126是此酶的底物特异性位点。