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动物内源性抗菌肽是一种广泛存在于动物体的呼吸道、消化道以及生殖道的具有广谱抗菌作用的阳离子多肽,在生物体的天然免疫和获得性免疫中扮演着重要的作用。禽β-防御素9(avian β-defensin9, AvBD9)是广泛表达于鸡体内组织尤其是消化道和免疫组织器官的一种重要抗菌肽,在鸡的抗感染免疫中发挥重要作用。乳酸杆菌作为小肠内优势菌群,其表面的细胞壁肽聚糖、脂磷壁酸等物质可以特异性地被肠道上皮细胞(intestinal epithelial cells, IEC)表面的Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)所识别,进而启动下游的信号通路,调节免疫应答。本实验提取了鼠李糖乳杆菌MLGA的5种细胞组分即细胞壁完整肽聚糖(whole cell wall peptidoglycan, WPG)、脂磷壁酸(lipteichoic acid, LTA)、全细胞壁组分(whole cell wall, WCW)、全细胞壁蛋白(cell wall protein, CWP)、灵李糖乳杆菌MLGA培养上清(Lactobacilli cultural supernatant, S);并采用荧光定量PCR的方法检测了5种细胞组分对原代培养的鸡小肠上皮细胞抗菌AvBD9基因表达的影响。结果表明,与对照组相比,鼠李糖乳杆菌MLGA白勺5种细胞组分均可以不同程度地促进AvBD9的表达,且不同细胞组分之间存在差异性。其中,鼠李糖乳杆菌MLGA的细胞壁完整肽聚糖(WPG)促进AvBD9基因表达的能力最强,且WPG对AvBD9基因表达的促进作用呈剂量和时间依赖性。本实验采用抗TLR2特异性抗体封闭、凝胶迁移率实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMS A)和信号通路分子特异性抑制剂等方法进一步探讨了鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞组分完整肽聚糖调控AvBD9基因表达的可能信号转导途径。研究发现,鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分细胞壁完整肽聚糖均能不同程度地提高TLR2mRNA的表达。特异性抗体封闭TLR2后,各组的AvBD9mRNA表达水平均出现不同程度的下降,其中以肽聚糖刺激组下降幅度最大。EMSA实验结果发现,鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分完整肽聚糖刺激上皮细胞后引起NF-κB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)和AP-1(activator protein1)核转录因子活性的增加,其中肽聚糖组为强阳性。MAPK (mitogen-activated protein kinase kinase)信号通路分子之-c-Jun N-terminal kinase (JNK)的特异性抑制剂SP600125和NF-κB特异性抑制剂PDTC预处理上皮细胞均阻断或降低鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分完整肽聚糖诱导的AvBD9基因表达,且PDTC抑制AvBD9基因表达的幅度大于SP600125。鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分完整肽聚糖通过TLR2-NF-κB/AP-1信号通路介导诱导上皮细胞AvBD9的表达,且以TLR2-NF-κB为主要信号转导途径。