第一部分 97例汉族血小板无力症临床和基因特点分析　　血小板无力症（Glanzmann’s thrombasthenia, GT）是一种罕见的遗传性出血性疾病。为常染色体隐性遗传，多见于近亲婚配家庭。患者多表现为自幼发生中重度的皮肤黏膜出血。血小板形态和数量正常，但对 ADP、凝血酶等生理诱聚剂反应低下或者缺如，对瑞斯托霉素的聚集功能正常。ITGA2B和ITGB3基因突变引起血小板膜表面 αIIbβ3 质或量的异常是导致血小板无力症的根本原因。本研究收集并分析了来自中国汉族93个家庭的97例血小板无力症患者的临床资料，对其中45例患者进行了基因检测。结果显示仅有18.3%的患者来自近亲结婚家庭，明显低于其他国家血小板无力症患者的近亲婚配比例。与其他种族相比，汉族人口在血小板无力症类型的分布上没有明显差异，以Ⅰ型血小板无力症最为多见，Ⅲ型血小板无力症最为少见。血小板无力症患者出血严重程度具有异质性，有些患者出血症状很重，而有些患者出血表现不明显。部分患者（25.2%）随着年龄增长出血症状明显缓解。女性比男性患者出血症状更重，自行缓解的比例更低，总体死亡率更高，预后较差。在45名基因检测患者中，我们共发现了43种不同位点的ITGA2B或ITGB3基因变异，其中25种未有报道。这些变异包括14种错义变异，4种无义变异，4种移码变异和3种剪切位点变异。其中11种是“致病性变异”，14种是“疑似致病性变异”。45名患者中，15名为纯合子，21名为复合杂合子，7名仅检测到一个杂合变异，另有2名患者未在ITGA2B和ITGB3基因上检测到变异。ITGA2B基因的c.1750C>T（p.R584X）， c.2671C>T（p.Q891X），c.2333A>C（p.Q778P） 变异和 ITGB3 基因的 c.1199G>A （p.C400Y） 变异分别出现在7、4、7和 2个无关家庭中。提示这几个变异是中国汉族血小板无力症的热点变异。具有相同基因型的血小板无力症患者表现为相同的血小板无力症类型，但出血严重程度不尽相同。这表明血小板无力症的临床表型不仅仅依赖于基因型，还与其他因素有关。我们的研究为进一步认识血小板无力症表型的异质性提供了依据。　　第二部分 血小板无力症临床异质性的分子机制研究　　为了进一步探明血小板无力症患者临床异质性的原因，我们选取了一例特殊的血小板无力症患者进行机制研究。GT39是一位25岁男性，25年来只表现过一次异常出血。在 ITGA2B 基因上具有复合杂合变异 c.2570G>T （ p.C857F ） 和c.1769G>A（p.R590Q）。体外细胞模型表明 c.2570G>T（p.C857F）和 c.1769G>A （p.R590Q）突变质粒使αIIb表达中度下降，但是功能完全丧失，表明这两个变异是导致GT39发病的致病突变。其机制可能通过破坏C857-C911二硫键的连接、改变第590位氨基酸的极性影响αIIbβ3的功能。该患者表明除了ITGA2B基因变异以外，可能还存在其他因素影响血小板无力症的出血表现。　　第三部分 三个无义突变的血小板无力症家系基因分析　　ITGA2B或者ITGB3基因的无义突变是导致血小板无力症的常见原因。患者往往表现为血小板膜表面αIIbβ3明显减少甚至缺如的I型血小板无力症。然而这类患者的出血表现却存在异质性。为了进一步探明无义突变的血小板无力症患者的发病机制，探索其异质性的原因，我们研究了三个无义突变的血小板无力症家系。通过分析三个家系患者DNA，cDNA，总蛋白表达，血小板膜表面蛋白表达情况，我们发现三位先证者无义突变的基因转录后同时存在无义突变介导的mRNA降解（NMD）和无义突变相关的剪切改变（NAS）两种情况。针对NMD和NAS的PTC124以及反义寡核苷酸治疗可能成为治疗无义突变的血小板无力症的潜在可行的治疗方法。我们的研究为血小板无力症的精准治疗提供了理论依据。　　补充部分 无义突变的血小板无力症基因编辑探索　　为了进一步探索无义突变的血小板无力症的治疗，我们使用CRISPR/Cas9 技术对 Meg01 细胞进行基因编辑，拟建立无义突变的人巨核细胞Meg01细胞模型。通过设计guide RNA，构建Crispr质粒，转化DH5α，抽提质粒，转染Meg01细胞，抽提DNA验证，筛选出了对Meg01细胞的ITGA2B基因具有剪切活性的guide RNA。