Reg蛋白在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障中的作用及其机制的研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:semitic
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是临床常见的急腹症,其发病急、病情进展快,并发症多,目前病死率仍高达30%。近几年研究显示SAP时肠黏膜屏障功能受损,容易发生肠屏障功能障碍(intestine barrier functional disturbance,IBFD),使肠黏膜通透性增加,是导致肠道细菌及内毒素发生移位,加速败血症的进程,诱发和加重全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障碍综合症(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS),甚至会引起死亡,因此在治疗原发病的同时对肠黏膜屏障的保护至关重要。近年来胰岛再生源蛋白(regenerating islet-derived protein, Reg)在SAP发生发展过程中的作用日益引起广泛关注。Reg蛋白是近几年发现的一类多功能分子,属C型凝集素超家族,大量研究表明Reg蛋白在多种生理、病理活动中发挥重要作用,在SAP发生发展过程中与促进细胞增殖、调控小学校细胞凋亡、抑制炎症因子过表达及抑制损伤部位周围病原微生物生长和扩散等功能有关,尤其再生基因RegI、III在急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)中的作用日益受到重视,现已有研究表明Reg可通过抑制NF-κB入核来调节TNF-α、IL-6等诱导的炎症因子的过表达从而抑制炎症的发生,还有研究显示IL-22可以调节Reg的表达,来抑制损伤部位细菌生长,但其在SAP时肠黏膜损害中的作用研究甚少。本实验旨在通过测定RegI、III蛋白及mRNA在SAP大鼠小肠中的表达,评价RegI、III水平与肠黏膜屏障损伤的关系;并通过分析应用特异性NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)预处理后的小肠RegI、III的变化,初步探讨Reg蛋白家族与NF-κB通路的关系。方法:1实验分组120只成年SD大鼠分为对照组(N组)、重症急性胰腺组(S组)、1mg/kg PDTC+重症急性胰腺炎组(P1组)、10mg/kgPDTC+重症急性胰腺炎组(P10组)、100mg/kgPDTC+重症急性胰腺炎组(P100组),各为12小时及24小时两组,共10组每组12只大鼠。2制造模型:本研究采20%L-精氨酸腹腔注射,间隔一小时制作大鼠SAP模型。S组腹腔注射20%L-精氨酸2.5g/kg2次(总共5g/kg大鼠质量),间隔一小时,诱导重症急性胰腺炎模型;N组于腹腔注射等体积0.9%氯化钠;P1、P10、P100组:于造模前1小时腹腔注射PDTC1mg/kg、10mg/kg、100mg/kg预处理。各组造模成功后12小时及24小时取血、胰腺及小肠组织。3实验方法:开腹后观察胰腺、肠道及周围组织情况,并通过苏木素-伊红(htoxylin eosin HE)染色光学显微镜观察胰腺、小肠的病理变化,ELISA方法检测血清中IL-22、TNF-α及I-FABP水平,采用荧光定量RT-PCR测定小肠组织中RegI、IIImRNA表达含量,应用Western blot检测小肠组织中NF-κB p65及RegI、III蛋白水平。4统计学方法:应用SPSS17.0软件包进行统计学处理。设α=0.05,P<0.05为差异显著,具有统计学意义。结果:1HE染色,S组胰腺组织结构紊乱,间质水肿明显,可见腺泡细胞坏死及出血,炎性细胞浸润,并随着时间进展而渐进性加重。肠道HE染色S组上皮细胞层坏死、脱落,部分绒毛形态不规则、部分脱落,固有层崩解,毛细血管扩张、充血,炎症细胞的浸润,24h较12h更严重。胰腺病理采用Schmidt评分、肠黏膜病理采用Chiu评分。结果显示S组较N组明显升高(P<0.01),且24h比12h更加严重(P<0.05),提示L-精氨酸可成功诱导重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤模型。2应用不同剂量PDTC干预后发现无论12h或24h,P1及P10组大鼠胰腺及肠道组织病理评分与S组比较明显降低(P<0.05), P100组与S组比较胰腺及肠道组织评分无明显差异(P>0.05);P10组在12h肠道评分较P1组无明显差异(P>0.05),而24hP10组评分较P1可见减低(P<0.05);P100组较P1组无论12h或24h均有明显升高(P<0.05);肠道评分S、P124h组较12h组明显升高(P<0.05)。3血清IL-22:S组明显高于N组(P<0.01);给予PDTC干预后,PDTC不同剂量组与S组比较明显降低(P<0.05);与P1组比较,12h及24h P10组无明显变化(P>0.05),而P100组较P1组可见明显升高(P<0.05);与P10组比较,P100组表达上升(P<0.05);S组24h IL-22较12h明显升高(P<0.05)。4血清TNF-α:与N组比较S组TNF-α表达明显升高(P<0.01);应用PDTC干预后,与S组比较P1、P10组表达降低(P<0.05),而P100组较S组无明显变化(P>0.05);P10组TNF-α表达低于P1组(P<0.05),而P100组表达高于P1组(P<0.05);S组、P100组24h较12h有明显升高(P<0.05)。5血清I-FABP:S组I-FABP表达明显高于N组(P<0.01);应用不同剂量PDTC干预后,与S组比较P1、P10组表达降低(P<0.01),而P100组较S组无明显变化(P>0.05);P10组I-FABP表达低于P1组(P<0.05),而P100组表达高于P1组(P<0.05);S组24h较12h有明显升高(P<0.05)。6小肠NF-κBp65:与N组比较S组NF-κB p65表达明显升高(P<0.01);给予PDTC干预后,P1及P10组与SAP组比较表达降低(P<0.05),而P100组较S组无明显变化(P>0.05);P10组NF-κB p65表达低于P1组(P<0.05),而P100组表达高于P1组(P<0.05);S组24h较12h NF-κB p65表达有明显升高(P<0.05)。7小肠RegI、III蛋白:S组RegI、III蛋白表达明显均高于N组(P<0.01);应用不同剂量PDTC干预后,与S组比较,P1、P10组表达降低(P<0.01),而P100组较S组无明显变化(P>0.05);P10组RegI、III蛋白低于P1组(P<0.05),而P100组表达高于P1组(P<0.01); RegI、III蛋白S及P100组24h较12h有明显升高(P<0.05)。8小肠RegI、III mRNA:与N组比较S组RegI、III mRNA表达明显升高(P<0.05);应用PDTC干预后,P1及P10组与S组比较表达降低(P<0.05),而P100组较S组无明显变化(P>0.05);P10组RegIII mRNA低于P1组(P<0.05),而P100组表达高于P1组(P<0.05);而小肠组织中P10组RegI mRNA表达12h较P1组明显降低(P<0.05),24h较P1组无统计学差异(P>0.05),在24及12h均可见P100组高于P10组(P<0.05);S24h组较12h明显升高(P<0.05)。9RegI、III蛋白表达与肠黏膜病理评评分、IL-22、I-FABP、TNF-α及NF-κBp65表达呈正相关。结论:1SAP大鼠小肠RegI、III表达增高,考虑RegI、III为肠黏膜屏障中调节因子之一,且其表达可能与IL-22、TNF-α等炎症因子有关。2PDTC对于NF-κB通路抑制作用与剂量相关,1mg/kg、10mg/kgPDTC抑制NF-κB通路活性,减轻SAP大鼠胰腺及肠屏障损伤,以10mg/kg作用更为明显,100mg/kg PDTC不能减轻胰腺及肠屏障损伤,但不论12h或24h100mg/kg PDTC组各指标均未达到SAP组水平。3RegI、III基因表达可部分通过NF-κB通路调节,肠黏膜损伤或炎症因子刺激致RegI、III表达上调,对黏膜损伤起起作用,其作用机制考虑为多个通路的共同调节,且不除外RegI、III基因之间的存在协同或拮抗作用,对于过度表达的RegI、III是否会加剧SAP时的肠黏膜损伤仍需进一步实验证实。
其他文献
目的:探讨Tim-3和PD-1在胃癌(GC)患者外周血和组织中CD4~+T淋巴细胞上的表达及其临床意义。方法:收集2013年1月至2014年1月间首次入住郑州大学附属肿瘤医院普外科54例GC患者
中国乳品的消费量稳定而高速的增长着,2000年是这样,一直到2005年依然没有改变,不出意外,2006年乃至今后相当长的若干年内这样的乐观形势还会延续。
11月23日,由中国科学技术学会、农业部、卫生部主办,世界卫生组织协办,中华预防医学会、中国畜牧兽医学会、中国微生物学会承办的"第二届全国人畜共患病学术研讨会"在江苏畜
探讨心电图对准确预测前壁急性心肌梗死时冠状动脉前降支闭塞位置的作用。方法对94例前壁AMI患者的心电图和冠状动脉造影资料进行分析。
在立法规定和司法实践上,"以营利为目的"都是判定是否成立侵犯肖像权的实质性要件。从对自然人肖像权全面保护和统一保护出发,对侵犯肖像权的构成要件所提出了去"以营利为目
目的:研究实验性牙移动及其引起的咬合变化对牙周神经末梢标记物分布,及对牙周终末雪旺细胞标记物S-100和神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)的表达。方法:用正畸皮圈推左侧
目的:观察颈型颈椎病的临床规律,提高疗效。方法:对207例颈型颈椎病进行临床观察,影像学比对,并对致病因素和发病机理进行分析,根据其规律进行分型与治疗。结果:显示颈型颈椎
会议
11月8日下午,由国家知识产权局专利复审委员会申诉处吴赤兵处长率领的调研组一行6人来泰州海陵区调研企业知识产权保护情况。调研组一行在泰州市和海陵区科技
目前我国生产的钼合金,无论是品种,还是质量,都满足不了国民经济发展的需求。迫切需要改善质量,增加品种,研制新型合金。本文正是为此目的,提供出有益的资料,以供这一领域中
目的:了解不同类型先天性心脏病(先心病)术后患儿神经心理发育情况及分析影响患儿神经心理发育情况因素. 方法:选取 2009 年 -2015 年在阜外医院接受第一次先心病手术治疗术
期刊