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目的:SPAG9作为支架蛋白参与MAPK信号通路，而ELK1是MAPK信号通路下游重要的效应分子之一，参与多种肿瘤转移过程。本研究通过检测肝细胞肝癌组织及肝癌细胞系中SPAG9和ELK1的表达水平，分析两者相关性及其与临床病理资料的关系。研究SPAG9干扰对HCC细胞系HCCLM3和HuH7迁移和侵袭的影响，并探讨ELK1表达在SPAG9调控的HCC转移中的作用。另外，SPAG9抗体在多种肿瘤高表达，在肝癌中表达报道较少。本研究分析探讨肝癌患者血清中SPAG9抗体表达水平及其对肝癌的诊断价值。 方法:采用免疫组化法检测50例HCC患者癌组织及其匹配癌旁组织中SPAG9和ELK1表达水平，分析SPAG9表达与临床病理资料的关系。用Spearman等级相关分析SPAG9和ELK1表达的相关性。经RT-PCR和Western blot检测HCCLM3、HuH7、HepG2细胞系中SPAG9与ELK1表达。采用ELISA和化学发光法定量检测血清中SPAG9抗体和AFP浓度，用ROC曲线评价SPAG9抗体和AFP的诊断价值。HCCLM3和HuH7细胞中转染SPAG9 siRNA降低SPAG9表达，RT-PCR和Western blot验证SPAG9siRNA干扰效果。细胞划痕、Transwell法研究SPAG9干扰对HCCLM3和HuH7细胞迁移和侵袭能力影响。构建ELK1过表达质粒上调ELK1表达，构建ELK1 siRNA下调ELK1表达，Transwell法研究HuH7细胞中ELK1过表达质粒与SPAG9 siRNA共转染，或ELK1 siRNA转染对细胞迁移和侵袭的影响。同时研究SPAG9或ELK1基因表达改变后，细胞中SPAG9、ELK1、磷酸化p38表达变化。 结果: 1.在50例肝细胞肝癌标本中，SPAG9主要表达定位于胞浆，其中30例(60％)检测到SPAG9基因高表达，癌组织表达显著高于癌旁组织(P＜0.001)。ELK1在癌组织主要表达定位于胞核或者胞浆，其中21例(42％)检测到ELK1在癌组织中高表达，癌组织表达显著高于癌旁组织(P＜0.001)。SPAG9和ELK1在三株HCC细胞系中表达情况为HCCLM3和HuH7中表达高于低转移能力的HepG2细胞。经Spearman等级相关性分析发现，在50例配对的HCC组织中SPAG9和ELK1表达正相关(P＜0.05)。临床病理资料分析发现SPAG9表达与肿瘤TNM分期，远处转移相关(x2=4.585，P=0.032; x2=5.556，P=0.018）。 2.PHC组血清SPAG9抗体水平[15.97(8.36～23.84) kIU/L]显著高于肝炎组[4.98(4.03～6.63) kIU/L，Z=13.83，P＜0.001]、健康对照组[4.96(3.64～8.18) kIU/L，Z=6.896，P＜0.001];但与肝硬化组[19.10(9.40～20.59)k IU/L，Z=0.096，P=0.923]、与转移性肝癌组[50.95(6.07～407.95) kIU/L，Z=0.949，P=0.343]相比差异无统计学意义。 3.ROC曲线确定SPAG9和AFP的临界值分别为8.14 kIU/L、14.1μg/L，曲线下面积分别为0.792、0.791，SPAG9抗体、AFP诊断PHC的准确度分别为78.9％(97/123)、77.2％(95/123)，敏感度分别为87.9％(58/66)、62.1％(41/66)，特异度分别为68.4％(39/57)、94.7％(54/57);两者联合诊断的ROC曲线下面积为0.860，敏感度和特异度分别为90.9％(60/66)、66.7％(38/57)，准确度为79.7％(98/123)。8.14 kIU/L为SPAG9诊断临界值时，6例患者SPAG9抗体表达均阳性(9.37～27.53 kIU/L)，其中5例组织中SPAG9免疫组化结果阳性，血清中SPAG9抗体浓度与组织SPAG9表达高度一致。 4.细胞划痕，Transwell迁移和侵袭实验发现干扰HCCLM3和HuH7细胞中SPAG9基因，SPAG9表达显著下调，细胞迁移和侵袭能力显著下降（P＜0.05）。Western和RT-PCR检测发现干扰SPAG9基因，HCCLM3和HuH7细胞系中ELK1表达下调，Western检测发现磷酸化p38表达下调。 5.ELK1质粒转染可以逆转SPAG9干扰介导的HuH7迁移和侵袭能力的下降，ELK1干扰后HuH7细胞迁移和侵袭能力下降。 结论:肝细胞肝癌中SPAG9和ELK1高表达，SPAG9高表达与ELK1表达正相关，与肿瘤TNM分期、远处转移相关。血清SPAG9抗体诊断原发性肝癌的准确性高于AFP，且癌变前就见升高。SPAG9抗体可能是原发性肝癌早期诊断和预后的有效指标。SPAG9 siRNA可抑制HCCLM3和HuH7细胞系迁移和侵袭，并降低ELK1和磷酸化p38表达，SPAG9诱导的HCC转移部分依赖ELK1表达，SPAG9抗原是抗HCC转移的一个潜在靶点。