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霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)是一种抗增殖类免疫抑制剂,通过选择性、非竞争性、可逆地抑制次黄嘌呤单磷酸脱氢酶(inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)阻断鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径从而发挥免疫抑制作用。目前MPA的主要制剂包括霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)和麦考酚钠(enteric-coated mycophenolate sodium,EC-MPS),作为主要的免疫抑制剂已被国内外广泛应用于移植器官急性排异的预防和治疗。本研究首次建立了液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法测定中国肾移植患者服用MPA后的IMPDH活性。首先在全血中提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经酶促反应后采用固相萃取法处理样本,检测样本中黄苷酸(xanthosine 5’-monophosphate,XMP)以及腺苷酸(adenosine 5’-monophosphate,AMP)的含量,并以后者作为衡量PBMC量的标准。色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(5μm,4.6 X 150 mm),采用梯度洗脱的方式,流动相为2 mM甲酸铵水溶液(氨水调节PH=8)和2 mmol·L-1甲酸铵甲醇溶液,流速为0.4 mL·min-1。采用ESI正离子模式多离子反应模式(multiple reaction monitoring,MRM)检测。XMP 离子对为 m/z 365.2→97.3,AMP离子对为m/z 348.4→136.1,内标Br-AMP为m/z 427.7→216.1。XMP在0.2-20μmol·L-1,AMP在5-100μmol·L-1范围内线性良好(r2>0.99)。日内及日间变异均小于15%,提取回收率为22.9%-33.6%;基质效应为94.8%-102.6%;过程回收率为23.0%-32.6%。本部分研究建立的基于色谱的IMPDH活性测定方法具有快速、简单、准确的特点,可以用于MPA的药效学研究。进一步研究肾移植患者服用MMF或EC-MPS达稳态后的0-12 h的MPA及其代谢物的浓度和IMPDH活性。计算MPA及代谢物主要药动学参数及药效学参数。对于服用MMF或EC-MPS患者,IMPDH活性与MPA 和霉酌酚酸酰基葡萄糖苷(mycophenolic acid acyl glucuronide,AcMPAG)浓度水平均呈负相关,MPA达峰时间与IMPDH活性最大抑制时间一致,没有明显的延迟。MPA与环孢素(cyclosporine A,CsA)联用患者的0-12h的AcMPAG的时间浓度曲线下面积(area under the effect-time curve,AUC)和 0-12h 的时间效应曲线下面积(area under the effect-time curve,AEC)高于与TAC联用组。采集74例肾移植患者的服药达稳态后0-12h标本,采用酶放大免疫分析法分析浓度,并提取患者DNA,采用SNaPshot技术分析MPA相关转运蛋白ABCB1、ABCC2、SLCOlB1、SLCOIB3以及与MPA药效相关的IMPDH I、IMPDHII的1 1个SNP的基因型。发现74位患者的主要基因型符合Hardy-Weinberg平衡。服用MMF或EC-MPS的患者中ABCC2 C24T携带T突变基因组的AUC0-12h值均低于野生纯合子基因组(P=0.060,P=0.002)。ABCC2 C24T和SLCO13 T334G可能与MPA的肝肠循环(enterohepatic circulation,EHC)相关。首次发现了 IMPDH I G125A、IMPDHIIT3757C突变型患者的服用MPA后的AEC0-12h高于野生型,可解释部分的IMPDH活性水平的个体差异。