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小儿肠道炎症性疾病,如新生儿坏死性结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis,NEC)、儿童炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)等,是常见的、且影响甚至严重威胁幼儿身体健康的一类疑难杂症,治疗起来十分困难,是当今儿科医学界的一大难题。目前这类肠道炎症性疾病的发病机制仍不明确,研究表明炎症介质是这类疾病发生发展的重要原因。与配方乳喂养的婴儿相比,人乳喂养的婴儿的肠道相关疾病的发病率明显较低。支链脂肪酸(branched chain fatty acids,BCFA)作为人乳的主要微量脂肪酸,是新生儿出生前后肠道中重要成分。然而,BCFA的炎症调节能力及其与肠道细胞的相互作用情况还不清楚,在乳脂中的种类与结构位置分布等问题还有待解决。为此,本论文首先研究建立了微量分离富集BCFA的方法,全面分析了乳脂及鱼油BCFA的组成与结构分布特征,以探索人乳脂BCFA的来源与影响,在此基础上,开展7种具有不同碳链长度与支链位置的BCFA的抗炎规律与机制研究,并进一步研究了含BCFA的甘三酯(triacylglyceride,TAG)的结构与抗炎功效、细胞吸收代谢的关系,为开发富含BCFA的结构脂产品提供依据。主要研究成果如下:首先,将urea-TLC应用到BCFA的分离,从而建立了尿素薄层层析(urea-TLC)结合银离子薄层层析(AgNO3-TLC)微量分离富集BCFA的新方法。设计采用无污染、现制现用、方便快捷的尿素浸润法和硝酸银动态浸涂法制备urea-TLC薄层板与AgNO3-TLC薄层板,优化得到最佳分离条件:尿素浸板时间为1 min、urea-TLC上样方式为尿素预溶解上样法、薄板上样量为200 mg、银离子展开剂为甲苯/正己烷体系。运用该方法可将脂质取样量从>50 g减少到200 mg,将BCFA的纯度从传统尿素溶剂法的11%提高到79.74%,解决了生物样品量小导致的BCFA检测困难的问题。结合色谱检测分析了人乳脂、动物乳脂及鱼油中BCFA的种类。结果表明:人乳脂中既有单支链BCFA,还有一类具有中间支链的多支链BCFA。从BCFA的种类而言,人乳脂中的BCFA种类与羊乳脂中的相似而比牛乳脂中的复杂;而鱼油中含有大量的多支链BCFA,BCFA组成最为复杂。其次,全面分析了BCFA在人乳脂、动物乳脂及鱼油的中极性脂(neutral lipids,NL)(polar lipids,PL)及三者TAG上的位置分布特征,以探索人乳脂BCFA的来源。从BCFA在NL和PL分布来看,人乳脂和动物乳脂的NL中BCFA含量较高,而鱼油的PL中BCFA含量较高。anteiso-BCFA是人乳脂中含量最多的BCFA,而鱼油中则是iso-BCFA比较多,动物乳脂中的这两种BCFA则都介于两者之间。胰脂酶水解样品TAG后分离得到sn-2单甘脂(monoacylglyceride,MAG),经色谱检测分析结果表明:在人乳脂中,BCFA倾向于分布在TAG的sn-2位置(68%);在牛乳脂和羊乳脂中,BCFA则倾向于随机均等地分布(sn-2位置33%);在五种常见的鱼油中,BCFA基本不太倾向于分布在sn-2位(低于10%)。对于具有相同支链位置的BCFA,随着碳链长度的增加,对应的BCFA在sn-2位的相对分布比例减小。所以,从BCFA的结构分布规律来看,人乳脂中的BCFA含量虽然受膳食摄入脂质影响,然而其独特的结构分布又说明了BCFA会在体内重新加工,转变成为结构与组成利于婴幼儿吸收代谢与营养健康的新BCFA脂质。再次,利用7种典型的具有不同碳链长度与支链位置的BCFA作为研究对象,研究了BCFA在肠道细胞中的抗炎作用规律与机制。以BCFA纯品为底物,DHA、EPA为参照,结合LPS(lipopolysaccharide)诱导的肠道细胞炎症模型,检测分析肠道细胞中BCFA组成与细胞活性变化,并q-PCR分析细胞内炎症因子IL-8(interleukin-8)、NF-κB(nuclear factor-kappa B)和细胞表面受体TLR 4(toll like receptor 4)表达的情况的结果表明:与DHA、EPA一样,BCFA的摄入能够显著提高炎症性肠道细胞活性(P<0.05)并显著减少细胞内IL-8、NF-κB和TLR 4的表达(P<0.05)。可以证明BCFA具有显著的抗炎功能,可能的抗炎机制是BCFA通过改变细胞脂肪酸组成,从而引发细胞表面的LPS受体TLR 4表达的降低,进而抑制LPS对NF-κB通路相关的炎症因子的激活。此外,BCFA的支链位置不同则抗炎能力不同,anteiso-BCFA的抗炎能力强于iso-BCFA。BCFA碳链长度越短,抑制炎症的能力越强。最后,比较了MAG与游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)形态的BCFA在肠道细胞的抗炎功效与吸收代谢,研究含BCFA的TAG的结构与抗炎功效及细胞吸收代谢的关系。分离制备含BCFA的脂肪酸组成一致的sn-2 MAG和FFA底物,通过细胞实验研究发现:短碳链BCFA不仅抗炎能力强,而且能够更多地被细胞吸收代谢(P<0.05)。在正常未发炎的细胞中,模拟BCFA在日常膳食中的浓度进行细胞培养,研究发现sn-2MAG处理的肠道细胞中总BCFA百分含量是FFA处理组的近2倍多(P<0.05),说明MAG形态的BCFA具有更好的吸收代谢效率。和动物乳脂及鱼油相比,人乳脂中BCFA多数分布在TAG的sn-2位,然而这种分布具有更高的吸收代谢率,所以最终在肠道细胞中保留的量更多。此外,MAG形态的BCFA在减少炎症因子IL-8与NF-κB的表达方面也强于FFA形态(P<0.05)。所以,MAG结构能够提高BCFA的肠道细胞吸收代谢率与抗炎功能,证明BCFA在TAG的sn-2位置分布对其吸收代谢与生理功能有重要影响。BCFA-MAG首次被发现可以作为一种新型的用于预防和调控炎症的药用营养组分。