盐生植物海蓬子抗肿瘤活性及其化学成分研究

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海蓬子(Salicornia europaea L.)为藜科(Chenopodiaceae)盐角草属(Salicornia L.)可生长于盐碱地和海滩等重盐质化土壤的经济植物。海蓬子营养成分丰富,茎中富含维生素C和氨基酸,是有益健康的绿色食品;种子是食用、药用高级化工原料;作为民间用药,海蓬子具有平肝、利尿、降压的作用,主治高血压和偏头痛。长期以来,海蓬子主要靠野生采集,近年来实现人工种植,已具有资源可获得性的优势,可实现大规模开发利用,对海蓬子的活性物质基础方面值得深入研究。本研究针对海蓬子在调节糖脂代谢类慢性疾病、提高免疫力、抗肿瘤等方面的活性进行了相关探究。首先对海蓬子提取物不同极性组分进行了初步细胞活性筛选,选择的细胞包括小鼠巨噬细胞raw264.7、人非小细胞肺癌A549、人肝癌细胞HepG2、脑胶质瘤细胞U251及小鼠成纤维细胞(前脂肪)3T3-L1。结果表明:正丁醇组分具有使小鼠巨噬细胞raw264.7增殖的作用;而石油醚组分则具有良好的抑制人非小细胞肺癌A549细胞生长的作用,在200μg/mL的浓度,作用72h时,抑制率达到78%。该步实验发现了海蓬子提取物石油醚组分具有优越的抗A549细胞增殖活性。其次,我们对该石油醚活性组分进行了制备工艺的研究,确定了最佳提取溶剂为70%乙醇,最优富集方法为石油醚萃取法,进而稳定了海蓬子抗A549细胞活性成分的制备工艺。再次,我们采用活性导向分离的方法对石油醚部位的活性化学成分进行了分析。石油醚萃取物中的低级性成分采用GC-MS的方法进行了分析,分离并鉴定了18种化合物,其中三种化合物9,12,15-Octadecatrienoic acid,methyl ester,(Z,Z,Z)-,9,12-Octadecadienoic acid(Z,Z)-和Cholest-5-en-3-ol(3á)-,tetradecanoate抑制A549细胞增殖活性已有报道,说明它们可能为石油醚提取物中的活性成分。石油醚萃取物中的中等极性成分经过正相吸附色谱和分子筛色谱逐级活性筛查,确定活性组分,最终RP-18柱色谱和凝胶色谱等方法分离和鉴定了3种主要活性化合物,它们分别为:Akebonic acid(1),24-methylenecycoartanol(2),Pheophorbide a(3)。因此,本研究初步确定了海蓬子提取物石油醚组分中发挥抗A549细胞增殖的主要活性化合物。本研究还对海蓬子其他化学物质基础进行了分析,运用多种色谱技术(silsca gel、Sephadex LH-20、ODS、HPLC、MCI)对其乙醇提取物的石油醚和正丁醇组分进行成分分离,利用MS、NM-R、IR、UV等光谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。从海蓬子的正丁醇部位分离并鉴定了化合物4和化合物5,它们分别是:3β-hydroxy-1-oxo-30-norolean-12,20(29)-dien-28-oic acid(4)、3β-hydroxy-30-norhederagenin(5);从海蓬子的石油醚部位分离并鉴定了化合物6-9,它们分别是:Stigmasterol(6),β-sitosrerol(7),24-Ethyl-5α-cholesta-7,22-dien-3β-ol(8),phytol(9).其中,化合物4和化合物5是从海蓬子属植物中首次分离得到,丰富了该属植物的化合物类型。
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