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中枢神经系统缺血/再灌注损伤不仅造成不同程度的神经功能障碍,影响患者的生存质量,而且严重者危及患者生命。尽管预防和治疗中枢神经缺血/再灌注损伤目前已成为多学科研究的热点和难点,然而至今仍未获得根本性突破。虽然化学预处理的脑保护作用研究取得了一定的成果,但由于这些物质的毒性和副作用而限制了其临床应用。以往的实验证明高压氧预处理有明确的脑保护作用,却由于其需要庞大的高压氧舱等设备亦限制了在临床广泛应用。长时间高浓度的吸氧有类似高压氧的作用,因而本实验试图通过逐步深入的有关实验研究为临床寻求一种简便易行而又行之有效的具有脑保护作用的方法,并初步探讨吸氧预处理脑保护作用的机理,为进一步研究预处理脑保护作用的机理提供实验依据。 目的 1、研究吸入100%氧气诱导脑缺血耐受对脑缺血/再灌注损伤产生保护作用及其时间关系。 2、研究氧自由基和吸氧预处理产生脑保护作用的关系。 3、观察原癌基因c-fos是否参与了对吸氧预处理的信号转导以及吸氧预处理对大脑功能活动状态的影响。 4、观察吸氧预处理对大脑皮质星形胶质细胞的影响。 方法 1、吸氧预处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤保护作用的研究 36 /q SD大鼠随机分为 4组(每组n—9):即 A组(对照组)吸空气 24 h;B、C和 D组分别连续吸 100%氧气 24,12和 6 h;所有动物吸氧或吸 空气后间隔 24 h造成局灶性脑缺血。局灶性脑缺血模型采用 3—0尼龙线线 栓法栓塞右大脑中动脉,120 min后拔出尼龙线使血液再灌注。脑缺血120 min和再灌注后24 h行脑功能障碍评分,并处死动物取大脑行TTC染色测 量脑梗死容积。 2、自由基和吸氧预处理致脑保护作用的关系 DMTh是自由基清除剂。32只SD大鼠随机分为4组(每组n—8):A 组(对照组)所有大鼠腹腔注射生理盐水 sml/kg后吸空气 24 h; B组腹腔注 射生理盐7K5ml&g后吸100%氧气24h;C组腹腔注射10%DMTU500mg/kg 后吸 100%氧气 24 h;D组腹腔注射 10%DMTU 500mg/kg后吸空气 24 h。所 有动物经上述处理后 24 h造成局灶型脑缺血模型采用 3—0尼龙线线栓法栓 塞右大脑中动脉,120 min后拔出尼龙线使血液再灌注。脑缺血 120 min和 再灌注后 24 h行脑功能障碍评分,并处死动物取大脑行 TTC染色测量脑梗 死容积。 3、吸氧预处理诱导的大鼠脑内F。s表达 随机将大鼠分为两组:吸氧预处理组和对照组(每组n—6)。吸氧组大 鼠吸 100%氧 24 h,对照组大鼠吸刀%氧 24 h。24 h后经心灌流、取脑;用 免疫组化法观察F。S蛋白在大鼠脑内的表达,比较两组大鼠的表达差异。 4、吸氧预处理对大脑皮质星形胶质细胞的影响。 随机将大鼠分为两组:吸氧预处理组和对照组(每组n=6)。吸氧组大 鼠吸 100%氧 24 h,对照组大鼠空气 24 h。24 h后经心灌流、取脑;用免疫 组化法观察胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)在大鼠大脑皮层的表达,比较 $opW4/w#4t%fdkk-3- 两组大鼠的表达差异。 结果 1、吸入 100%氧气诱导脑缺血耐受对脑缺血/再灌注损伤产生保护作用 及其时间关系 24 h神经功能障碍评分 B组(0.8士0.9)明显低于 A组(2.2士1.2) (P<0刀5),C组(2刀士1.1)、D组(2.1土0.幻与A组相比无显著差另。脑梗死容 积 B组(104.8上62.lmm3)显著小于 A组(199.0士69*…3)(P<0*1),目 吸 100%氧气 24 h组与对照组相比其脑梗死容积有明显差异;C,D组和 A 组之间无显著差别,即吸 100%OZIZ h和 6 h组与对照组相比其脑梗死容积 无明显差异。 2、自由基清除剂DMTU和吸氧预处理产生脑保护作用的关系 24 h字经功能障碍评分 B组(0.6土0.7)明显低 于 A组(.3土0.9) (P<0.05),C组(2.3土0.刀、D组(2.3土0.8)和 A组之间无显著差另。脑梗死容 积B组(75石土59石mrn3)显著小于A组 (18.9士69.sllllrl3)(P<0.of),C组 门79.9士54.4 h‘),D组(20O.4士44.5 o八和A组之间 无显著差别,B 经腹腔注射 10%DMTU 500mg/kg后吸 100%氧气 24 h和腹腔注射 10% DMTU 500mg/kg后吸空气 24 h预处理的大鼠间隔 24h后造成脑缺血组与对 照组相比其脑梗死容积无明显差异。 3、吸氧预处理诱导的大鼠脑内F