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目的:(1)临床观察扶芳藤益心方治疗气虚血瘀证胸痹(慢性稳定性心绞痛)患者的临床疗效及其内源活性物质水平变化的影响。(2)实验研究扶芳藤益心方对体外缺氧/复氧(H/R)损伤后人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)的保护作用及机制。方法:(1)临床上选择82例气虚血瘀证胸痹(慢性稳定性心绞痛)患者,年龄在35-79岁之间,随机分为治疗组和对照组,每组各41例。对照组为常规西药治疗(抗血小板药物、硝酸酯类、β受体阻滞剂、ACEI等);治疗组在对照组常规西药治疗基础上加扶芳藤益心方汤剂口服,早晚各1次,每次200ml。两组疗程均为4周。观察两组治疗前后的中医证候疗效、心绞痛疗效、心电图疗效及患者血清VEGF、ET-1、hs-CRP、IL-1β水平的变化。(2)通过扶芳藤益心方、益心方水提和醇提的比较,选择提取率高者作为扶芳藤益心方、益心方提取方法。观察扶芳藤益心方、益心方水提物和醇提物对小鼠的急性毒性试验,评价药物的安全性。采用血清药理学方法,制备不同阶梯浓度的扶芳藤益心方和益心方含药大鼠血清干预HUMCE,采用MTT法检测HUMCE活性,选择最佳的含扶芳藤益心方、益心方大鼠血清浓度。实验随机分为正常组和造模组:模型对照组、扶芳藤益心方组、益心方组、阳性对照组(卡托普利10-2mol/L(CAP1)、10-3mol/L(CAP2)、10-4mol/L(CAP3))。体外建立H/R损伤后HUMCE模型,根据实验分组,采用含药大鼠血清干预:MTT法检测HUMCE活力,流式细胞仪检测HUMCE的Caspase-3阳性细胞数;硝酸还原酶法检测HUMCE上清液中NO含量和NOS活力;ELISA法检测HUMCE上清液中VEGFR-2和VEGF的含量;Western blot法检测HUMCE的ET-1和ECE蛋白表达水平;PCR法检测HUMCE的ET-mRNA和iNos-mRNA基因表达水平。结果:(1)中医证候疗效比较:治疗组总有效率90.2%,对照组总有效率73.2%,两组间比较有统计学意义(p<0.05);心绞痛疗效比较:治疗组总有效率87.8%,对照组总有效率82.9%,两组间比较无统计学意义(p>0.05);心电图疗效比较:治疗组总有效率75.6%,对照组总有效率61.0%,两组间比较无统计学意义(p>0.05);两组治疗后vegf水平均较治疗前显著升高(p<0.01),且治疗组vegf升高水平显著高于对照组(p<0.01);两组治疗后et-1、hs-crp、il-1β水平均明显下降(p<0.05),且治疗组et-1、hs-crp、il-1β下降水平优于对照组(p<0.05)。(2)扶芳藤益心方和益心方醇提优于水提,且扶芳藤益心方和益心方醇提物小鼠急性毒性实验安全;2倍人日用剂量扶芳藤益心方和4倍人日用剂量益心方制备大鼠含药血清对h/r损伤后humce活性最佳。(3)模型对照组:与扶芳藤益心方组,益心方组,cap1组、cap2组、cap3组比较:模型对照组的细胞活力、no含量、nos活力、vegf浓度、vegfr-2浓度及inos-mrna基因表达均降低(p<0.05),caspase-3阳性细胞数也降低,分别降低了9.87%、3.1%、14.26%、7.38%、4.17%(p<0.05);模型对照组的et-1、ece蛋白及et-mrna基因表达均明显升高(p<0.05)。扶芳藤益心方组:与益心方组比较,益心方组的细胞活性、no含量、nos活力、vegf浓度、vegfr-2浓度及inos-mrna基因表达均降低(p<0.05),et-1、ece蛋白表达及et-mrna基因表达明显增加(p<0.05),caspase-3阳性细胞数降低6.77%(p<0.05);与cap1组比较,cap1组的细胞活性、no含量、nos活力、vegf浓度、vegfr-2浓度及inos-mrna基因表达均升高(p<0.05),caspase-3阳性细胞数升高4.39%(p<0.05),et-1、ece蛋白及et-mrna基因表达均降低(p<0.05);与cap2组比较,cap2组的细胞活性、no含量降低(p<0.05),caspase-3阳性细胞数降低了2.49%(p<0.05),et-1、ece蛋白表达及et-mrna基因表达明显增加(p<0.05);与cap3组比较,cap3组的细胞活性、no含量、VEGF浓度、VEGFR-2浓度均降低(P<0.05),Caspase-3阳性细胞数降低了5.70%(P<0.05),ET-1、ECE蛋白表达及ET-mRNA基因表达均明显增加(P<0.05)。益心方组:与CAP1组、CAP2组、CAP3组比较,CAP1组、CAP2组、CAP3组的细胞活性、NO含量、NOS活力和VEGF浓度、VEGFR-2浓度均升高(P<0.05),ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表达均降低(P<0.05),CAP1组、CAP2组的iNOS-mRNA基因表达增加(P<0.05),CAP3组的iNOS-mRNA基因表达降低(P<0.05)。结论:(1)扶芳藤益心方可以缓解气虚血瘀证胸痹(慢性稳定性心绞痛)患者的心绞痛,改善中医证候和心电图缺血表现,且增加患者VEGF分泌,减少ET-1、hs-CRP、IL-1β分泌,从而调节内源性活性物质平衡及抑制其炎症反应,保护人心内膜微血管内皮细胞,促进其功能的恢复。(2)扶芳藤益心方、益心方均能增加H/R损伤后HUMCE的增殖活性,且可促进人心内膜微血管内皮细胞VEGF、VEGFR-2与NO、NOS的分泌,增加iNOS-mRNA基因表达,下调ET-1、ECE蛋白表达水平和降低ET-mRNA基因表达,重新维持ET/NO关系平衡,达到稳定H/R损伤后HUMCE结构的完整和改善其功能。扶芳藤益心方保护H/R损伤后HUMCE的作用优于益心方和卡托普利10-4mol/L浓度,与卡托普利10-3mol/L浓度的保护作用基本一致。