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背景:急性B淋巴细胞白血病(acute B lymphoblastic leukemia,B-ALL)是一类高度异质性的疾病,包含不同的生物学和预后特征。尽管大部分的B-ALL患者经传统化疗或联合分子靶向治疗后能获得完全缓解,但仍然持续存在微小残留病灶。随着嵌合抗原受体T细胞等免疫疗法的出现,一定程度上延长了患者的生存期,改善了治愈率,但其相关副作用限制了长期应用。Ph染色体阳性作为B-ALL中一个独立的不良预后因素,虽然随着伊马替尼的应用对于该亚型的疗效有所提高,但由于耐药的出现而缺乏长期有效性。因此,微小残留病灶的清除和逆转伊马替尼耐药是防止复发、延长患者生存期的关键。寻找一种既能激活机体免疫系统的免疫治疗靶点,又能发挥直接抗肿瘤的低毒性药物极为重要。Toll样受体9(TLR9)作为Toll样受体中的一种,是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁,已有研究表明,刺激B-ALL的TLR9可产生Th1型获得性免疫反应,同时TLR9激动剂的有效性及安全性在临床试验中均得到证实,但对于CpG基序的单链脱氧寡核苷酸(CpG ODN)刺激后的B细胞恶性肿瘤的反应性表现出强烈的异质性。结合文献报道,CpG ODN对于Ph染色体阳性的B-ALL细胞系(Sup-B15、KOPN57bi、OP-1)均未见共刺激分子的上调,但具体分子机制尚无报道,对于CpG 685刺激B-ALL的直接作用及免疫调控作用的机制有待进一步探索。目的:1.筛选B-ALL治疗的潜在靶点。2.明确B-ALL对于CpG 685治疗存在异质性的原因,筛选TLR9激动剂治疗敏感人群的特征,寻找可能的联合治疗方案。方法:1.应用实时定量RT-PCR测定B-ALL临床样本中TLR9的mRNA水平表达情况,应用SPSS23.0统计软件分析TLR9表达量与临床特征之间的相关性。2.应用WST-1法、流式细胞术等检测CpG 685对B-ALL增殖、凋亡、细胞周期及CD40、CD80等共刺激分子调控情况的影响。3.应用ELISA法检测Cp G 685对B-ALL ATP释放情况的影响,明确是否存在免疫原性死亡。4.应用免疫印迹试验检测CpG 685刺激B-ALL后TLR9下游相关信号通路激活情况,应用关键分子抑制剂进一步探究促BLIN-1细胞系凋亡的机制及Sup-B15对CpG 685耐药的机制。5.应用Immunoprecipitation(IP)方法检测BAX激活情况。结果:1.大于95%B-ALL患者均存在TLR9的表达,TLR9的表达与B-ALL患者的细胞遗传学相关,且TLR9在Ph染色体阳性的患者中存在高表达。2.CpG 685能增加B-ALL细胞表面共刺激分子的表达,上调FAS、DR4等表面分子,进而增强B-ALL细胞的免疫原性,但表面分子激活情况存在异质性。3.CpG 685能够诱导BLIN-1细胞系发生凋亡、G1期阻滞,但不能诱导免疫原性死亡。4.CpG 685诱导BLIN-1细胞系凋亡的通路主要是由于C-MYC的高表达,通过P53依赖及非依赖的凋亡途径,上调BAX的表达水平、促进BAX的活化,从而使BLIN-1细胞对P38 MAPK所诱导的P53磷酸化的凋亡刺激敏感。同时C-MYC反馈抑制NF-κB的持续激活,最终导致凋亡的发生。5.Ph染色体阳性的人群对CpG 685耐药与BCR-ABL阻断BAX活化相关。6.伊马替尼与CpG 685联合应用能逆转伊马替尼及CpG 685单独应用的耐药。结论:1.TLR9是B-ALL治疗的潜在靶点,可能是Ph染色体阳性B-ALL患者伊马替尼耐药后逆转耐药和联合治疗的靶点。2.CpG 685对B-ALL通过直接杀伤作用和增强免疫系统的间接杀伤作用多途径抗肿瘤。3.筛选C-MYC高表达,同时Ph染色体阴性的B-ALL人群是应用CpG 685治疗的关键。4.伊马替尼与CpG 685联合应用有助于逆转伊马替尼耐药,并增强对CpG685的治疗反应,减少毒副作用,更大程度的杀伤肿瘤。