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本研究以转碱蓬脱水素基因(DHN)的烟草、野生型烟草为材料,分别在DNA分子水平,蛋白表达水平及生理水平对转基因植株进行了检测,以期获得可遗传的转碱蓬脱水素基因(DHN)植株,为进一步研究该基因的功能及机制提供可靠的材料。转碱蓬脱水素基因烟草分子水平上的鉴定主要包括PCR检测和Southern印迹杂交检测。提取转基因烟草、野生型烟草的总DNA,PBI121-DNH-农杆菌质粒,以PBI121-DNH-农杆菌质粒为阳性对照,以野生型烟草总DNA为阴性对照。在脱水素特异性引物的作用下进行PCR检测。PCR检测出6株阳性转脱水素基因烟草。但PCR检测可能出现假阳性结果,故进一步进行了Southern印迹杂交试验。以标记的PBI121-DNH-农杆菌质粒为探针,与阳性对照、阴性对照、转基因烟草总DNA杂交,采用酶联免疫CSPD的方法对杂交信号显色。显色结果表明经PCR检测的6株阳性转基因烟草均有明显的杂交信号,说明脱水素基因成功的导入烟草基因组中。转碱蓬脱水素基因烟草蛋白表达水平上的鉴定主要进行了原核表达、聚丙烯酰氨凝胶电泳和Western印记杂交检测。提取经PCR和Southern检测的阳性转基因烟草、野生型烟草的总蛋白,PET28b-SsDHN-大肠杆菌BL21表达蛋白,以pET28b-SsDHN-大肠杆菌BL21表达蛋白为阳性对照,以野生型烟草总蛋白为阴性对照。通过聚丙烯酰氨凝胶电泳分离不同分子量的蛋白,根据脱水素蛋白理论分子量27KD筛选出脱水素蛋白条带,电泳结果表明6株烟草均在27KD处有条带,说明脱水素蛋白可能成功表达。再与脱水素多克隆抗体(一抗)杂交,“脱水素——抗”结合物与碱性磷酸酶标记的二抗杂交,采用BCIP/NBT方法检测杂交信号。检测结果表明27KD处的蛋白条带均有杂交信号,说明6株转基因烟草均表达了脱水素蛋白。转碱蓬脱水素基因烟草的生理功能分析主要包括相对电导率、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、游离脯氨酸含量四个指标。随着盐浓度的增加,转基因烟草和野生型烟草的相对电导率、丙二醛含量均增加,但在相同的盐浓度下,转基因烟草相对电导率、丙二醛含量低于野生型烟草；转基因烟草的超氧化物歧化酶活性一直在升高,而野生型烟草的超氧化物歧化酶活性先升高后降低，且在同一盐浓度下,转基因烟草超氧化物歧化酶活性高于野生型烟草；转基因烟草和野生型烟草的游离脯氨酸含量均先升高后降低,但在同一盐浓度下转基因烟草游离脯氨酸含量高于野生型烟草。结果表明转基因烟草的耐盐性优于野生型烟草,说明转碱蓬脱水素基因的烟草具有耐盐性功能。