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研究背景恶性淋巴瘤是国人常见恶性肿瘤之一。弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是恶性淋巴瘤中最常见的类型,化疗是治疗的主要手段。多数的DLBCL患者经标准化疗方案治疗后可以缓解,但是25～30%的DLBCL患者对化疗药物耐药,属于难治性DLBCL,尤其是活化B细胞（ABC）型DLBCL（ABC-DLBCL）,是目前临床上治疗的难点。细胞分裂周期相关蛋白激酶7（CDC7）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,通过磷酸化激活其下游的微小染色体维持蛋白MCMs（minichromosome maintenance complex）发挥作用,尤其对MCM2的磷酸化作用最强。MCM2磷酸化后被激活,通过空间构象的改变来解除对解旋酶的抑制,从而促使DNA的复制,参与肿瘤细胞的增殖与细胞周期调控。有关CDC7、MCM2与DLBCL预后关系的研究不断有报道,但是尚无一致结论。CDC7在人类许多肿瘤细胞系中过表达,包括DLBCL。那么CDC7是否与ABC-DLBCL患者的耐药相关?干预CDC7蛋白的表达是否能诱导ABC-DLBCL细胞的凋亡?干预CDC7蛋白与一线治疗联合是否能提高ABC-DLBCL细胞的凋亡率?针对这些问题,目前尚无报道。这些问题的解决将有助于我们阐明难治性DLBCL患者的耐药机制,并改善这部分患者的治疗疗效。研究目的1、研究CDC7、MCM2是否与DLBCL患者的预后相关。2、研究CDC7、MCM2与传统预后指标的相关性,CDC7、MCM2能否成为DLBCL的特异性预后指标。3、干预CDC7蛋白表达对ABC-DLBCL凋亡的影响,明确CDC7蛋白介导ABC-DLBCL的耐药机制。4、干预CDC7蛋白表达与一线治疗联合诱导ABC-DLBCL凋亡是否有协同增效作用,提出靶向调控CDC7蛋白可能成为改善ABC-DLBCL患者治疗疗效的潜在方案。研究方法本研究将从临床试验和基础实验两方面进行:1、临床试验:选择天津医科大学肿瘤医院2008年1月至2010年1月收治的60例初治DLBCL患者,取骨髓、外周血及组织蜡块标本。患者一线均接受RCHOP方案化疗。回顾性分析其性别、年龄、ECOG评分、AnnArbor分期、IPI评分、骨髓是否累及、B症状有无、结外受累数目、血乳酸脱氢酶（LDH）数值、治疗模式、组织细胞来源等临床资料,按照实体瘤评价标准进行疗效评价,随访至2010年12月。应用免疫组化法测定组织蜡块中CDC7、MCM2蛋白的表达,并应用荧光定量PCR法测定患者外周血及骨髓中CDC7、MCM2mRNA的表达,阐明CDC7、MCM2与DLBCL患者预后的关系,明确CDC7、MCM2与传统预后指标的相关性。试图找到针对DLBCL患者的特异性预后指标。2、基础实验:体外培养 ABC、GCB-DLBCL 细胞系,Western-Blot、RT-PCR法检测细胞中CDC7蛋白及CDC7mRNA的表达,将CDC7shRNA转染至ABC-DLBCL细胞,干预CDC7蛋白的表达,检测其下游MCM2、pMCM2蛋白表达水平的变化,探讨CDC7与MCM2相互作用的关系;检测干预CDC7蛋白后诱导ABC-DLBCL细胞凋亡水平的变化,CDC7蛋白干预与美罗华联合诱导ABC-DLBCL的凋亡是否有协同增效作用,Western-Blot、RT-PCR法检测凋亡通路相关分子指标的变化,明确凋亡机制。试图阐明CDC7蛋白介导ABC-DLBCL的耐药机制,为研制针对CDC7的新型靶向药物提供理论依据。结果1、DLBCL患者的组织腊块、外周血及骨髓中CDC7、MCM2表达水平是患者的预后不良因素,CDC7、MCM2高表达组患者的2年生存率明显低于低表达组患者（P<0.05）,差异具统计学意义。2、CDC7、MCM2表达水平与DLBCL患者的IPI评分、Ann-Arbor分期呈正相关（P<0.05）,CDC7、MCM2与IPI评分、Ann-Arbor分期结合可以成为DLBCL患者的特异性预后指标。3、DLBCL患者外周血CDC7mRNA、MCM2mRNA水平与组织及骨髓中CDC7蛋白、MCM2蛋白、CDC7mRNA、MCM2mRNA水平呈显著正相关（P<0.05）,可以用患者外周血代替组织、骨髓标本,检测其中CDC7、MCM2表达水平,分析其与DLBCL患者预后的关系,将为临床工作带来很大便利,适合于临床广泛应用。4、干预CDC7蛋白表达可通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白Bax的表达来诱导ABC-DLBCL细胞凋亡,与美罗华联合具有协同增效作用。结论1、CDC7、MCM2表达与DLBCL患者预后的关系,CDC7、MCM2与IPI评分、Ann-Arbor分期结合可以成为DLBCL患者的特异性预后指标,较传统预后指标更准确地评价DLBCL患者的预后,指导个体化治疗方案的制定,以提高DLBCL患者治疗的有效率及生存期。2、CDC7介导了 ABC-DLBCL患者对于一线治疗的耐药,靶向调控CDC7蛋白可以成为治疗ABC-DLBCL的新方法,与美罗华联合可延长ABC-DLBCL患者的生存期。