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转化生长因子β1(TGFβ1)是一种多功能的细胞因子,在多种细胞的生长、分化和免疫功能中起着重要作用。本试验采用PCR、生物信息学、实时荧光定量PCR、原核表达、蛋白纯化和液相质谱检测等技术方法对鲫鱼TGFβ1基因结构特征、表达调控以及TGFβ1蛋白在鲫鱼体内的功能进行探究。主要结果如下:获得鲫鱼TGFβ1基因cDNA序列的CDS区序列长1134 bp,共编码377个氨基酸,具有由22个氨基酸构成的信号肽,在胞外表达不属于跨膜蛋白,氨基酸序列上的第280个氨基酸到第376个氨基酸可形成TGFβ样结构域,在鱼类中较为保守,与哺乳动物在进化关系上距离较远。鲫鱼TGFβ1基因对复合益生菌的应答显示:与不添加益生菌的对照组(A)相比,在第30 d时TGFβ1在添加沼泽红假单胞菌组(B)、添加沼泽红假单胞菌+枯草芽孢杆菌组(C)和添加沼泽红假单胞菌+枯草芽孢杆菌+屎肠球菌组(D)心脏、肌肉、肝脏中的表达量极显著上升(P<0.01),在第20 d时TGFβ1在B组肌肉中表达上调极显著(P<0.01)。TGFβ1下游通路基因TAK-1、SMAD2、SMAD3、SMAD7的检测结果显示:与对照组A相比,在30 d时TAK-1在B组肌肉中表达量极显著降低(P<0.01),在20 d时SMAD2、SMAD3、SMAD7在B组肌肉中表达量极显著升高(P<0.01)。成功构建表达载体TGFβ1-pDE2,SDS-PAGE电泳显示获得大小约为43 kDa的目的蛋白,纯化后蛋白定量浓度为641.42μg/mL,液相质谱检测表达蛋白为TGFβ1蛋白,肽段评分856,序列覆盖率为50%。表达出的TGFβ1蛋白具有一定的活性与功能。血清学指标结果显示,与注射PBS鲫鱼对照组(S1)相比,在24 h时注射TGFβ1蛋白鲫鱼组(S2)和灌食TGFβ1蛋白鲫鱼组(S3)的碱性磷酸酶和溶菌酶活力极显著上升(P<0.01),S2组超氧化物歧化酶活力在36 h时极显著上升(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测显示,与对照组S1相比,在24 h时S2组和S3组的HSP 30和HSP 47在心脏中表达量极显著升高(P<0.01),IL-11在心脏中表达量极显著下降(P<0.01)。这表明TGFβ1对鲫鱼免疫机能可能具有一定促进作用。