论文部分内容阅读
目的:建立雌激素缺乏骨质疏松大鼠的实验动物模型,进行正畸牙齿移动,通过观察大鼠正畸牙齿移动速度、破骨细胞及破牙骨质细胞计数、以及龈沟液内牙本质涎蛋白(dentin Ssaloprotein,DSP)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoproteins,DSPP)在加力不同时间段的表达,研究骨质疏松大鼠正畸牙齿移动牙根吸收的特点。方法:选取6月龄雌性Wistar大鼠50只,随机分为10组,即骨质疏松组:加力0天、5天、7天、10天、14天;健康对照组:加力0天、5天、7天、10天、14天。每组5只。骨质疏松各组切除大鼠双侧卵巢,造成雌激素缺乏骨质疏松实验动物模型,健康对照组施行假手术。术后6个月在各组大鼠双侧上颌第一磨牙及中切牙间安装Ni-Ti螺旋拉簧,牵引上颌第一磨牙向近中移动,力值约0.49N,建立正畸牙齿移动的实验动物模型。在加力前及加力0、5、7、10、14天后,利用预制的特殊托盘和藻酸盐印模材制取加力前后大鼠双侧上颌磨牙区的精确模型,超硬石膏灌注。体视显微镜观察测量超硬石膏模型,记录上颌第一磨牙移动距离。所有模型由同一人测量三遍。分别于加力0、5、7、10、14天后,利用15﹟吸潮纸尖吸取各组大鼠上颌第一磨牙腭侧龈沟液,通过Western blot方法检测各组龈沟液样本内DSP、DSPP的表达。切取大鼠双侧上颌骨标本(包含上颌三颗磨牙及其牙周组织),各组实验动物于预定时间经4%多聚甲醛经心脏灌注处死,常规固定、脱钙、脱水、包埋,制作上颌磨牙及其牙周组织的石蜡切片。进行HE和TRAP染色,计数破骨细胞及破牙骨质细胞,观察牙根吸收的情况。同时取各组实验动物左后肢股骨、胫骨及椎骨,使用双能X线骨密度检测仪,应用小动物软件测定其骨密度。所有数据利用SPSS 13.0统计软件,进行t检验,以P<0.05具有统计学意义。结果:1骨质疏松动物模型鉴定骨密度测量值显示,切除大鼠双侧卵巢6个月后,其左后肢股骨、胫骨和腰椎(L2～L4)的骨密度分别为0.19±0.01 g/cm2、0.14±0.01 g/cm2、0.17±0.01 g/cm2,对照组左后肢股骨、胫骨和腰椎(L2～L4)的骨密度分别为0.20±0.01 g/cm2、0.15±0.01 g/cm2、0.21±0.02g/cm2且P<0.05,骨质疏松组和健康对照组各组间差异有统计学意义。2大体标本观察骨质疏松加力5、7、10、14天组实验动物上颌第一磨牙均明显近中移动,并有轻微的牙合向伸长,上颌第一、二磨牙间存在肉眼可见间隙。健康对照加力7、10、14天组实验动物第一磨牙明显近中移动及牙合向伸长,上颌第一、二磨牙间有肉眼可见间隙。3上颌第一磨牙移动距离经体视显微镜测量超硬石膏模型,相同加力时间牙齿移动距离分别为:加力5天骨质疏松组74.14±4.38μm,健康对照组58.03±6.40μm;加力7天骨质疏松组169.96±28.97μm,健康对照组127.87±6.05μm;加力10天骨质疏松组260.84±41.85μm,健康对照组195.61±9.53μm;加力14天骨质疏松组182.72±21.39μm,健康对照组250.09±28.21μm;P<0.05,相同加力时间骨质疏松组和健康对照组各组间差异有统计学意义。4组织切片观察骨质疏松组各组石蜡切片标本经HE染色,光镜下可见破骨细胞、破牙骨质细胞,牙槽骨吸收和牙根吸收。对照组各组石蜡切片标本经HE染色,光镜下可见破骨细胞、破牙骨质细胞及牙槽骨吸收,牙根吸收达牙本质层。且此种趋势随加力时间延长,愈加明显。各组TRAP染色均有阳性表达。相同加力时间破牙骨质细胞计数分别为:加力5天骨质疏松组1.50±1.58,健康对照组5.20±2.30;加力7天骨质疏松组1.90±2.56,健康对照组5.80±3.74;加力10天骨质疏松组3.40±2.59,健康对照组12.00±12.32;加力14天骨质疏松组2.40±1.26,健康对照组4.20±1.81;P<0.05,相同加力时间骨质疏松组和健康对照组各组间差异有统计学意义。相同加力时间破骨细胞计数分别为:加力5天骨质疏松组9.40±1.78,健康对照组2.20±1.40;加力7天骨质疏松组11.60±2.88,健康对照组4.50±2.12;加力10天骨质疏松组6.20±1.75,健康对照组4.50±1.78;加力14天骨质疏松组4.50±1.78,健康对照组2.30±1.95;P<0.05,相同加力时间骨质疏松组和健康对照组各组间差异有统计学意义。5DSPP、DSP的Western blot检测结果利用15﹟吸潮纸尖提取大鼠上颌第一磨牙腭侧龈沟液后,Western blot结果显示骨质疏松加力7～14天各组样本DSPP、DSP均有表达,加力5天组仅有DSPP表达。对照组加力5～14天样本DSPP、DSP均有表达。利用BandScan V5.0图像分析软件对各组样本DSPP和DSP进行灰度分析结果显示,Western blot结果加力5天,骨质疏松组为118.60±7.89,健康对照组为156.60±16.46;加力7天,骨质疏松组为132.00±9.57,健康对照组为177.80±13.55;加力10天,骨质疏松组为118.60±16.33,健康对照组为178.00±9.97;加力14天,骨质疏松组为113.60±14.94,健康对照组为169.80±13.81;P<0.05,相同加力时间骨质疏松组和健康对照组各组间差异有统计学意义。结论:1以0.49N的力值加力5～14天,骨质疏松组大鼠上颌第一磨牙移动速度较对照组快。2在相同力值,相同加力时间内,骨质疏松组大鼠正畸牙齿移动牙根吸收的程度较对照组轻。