香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)是一种重要的植物病原线虫。该线虫寄主范围广泛，已知寄主达360多种，是目前世界香蕉产量损失的主要原因之一。近几年该线虫随着观赏植物的进口传入我国的部分温室，对我国观赏植物造成严重危害和损失。目前此线虫的防治研究工作进展缓慢，而随着分子生物学研究的深入，运用分子生物学技术研究其致病机理以期寻找控制该线虫的方法成为可能。钙网蛋白(CRT)在人类和多种动物寄生线虫中被发现，并被证实与线虫寄生和致病密切相关，是近年来备受关注的一类靶标蛋白酶。本研究从香蕉穿孔线虫中分离得到钙网蛋白基因全长，并对香蕉穿孔线虫钙网蛋白进行原核表达。主要研究结果如下： 1.采用同源克隆，通过RACE技术首次获得香蕉穿孔线虫CRT基因，其cDNA全长为1527 bp，该基因包含一个长1206 bp的完整ORF，编码含有401个氨基酸组成的、分子量为46.99696 kD的蛋白，将其命名为Rs—crt。同时以香蕉穿孔线虫基因组DNA为模板，扩增到香蕉穿孔线虫CRT基因的DNA编码区，编码区包含有6个内含子，共303bp，获得了香蕉穿孔线虫CRT基因结构上的基本信息。 2.运用生物信息软件对该基因的结构及功能进行预测，通过蛋白一级、二级结构分析及三维同源建模，信号肽预测、亚细胞定位等，发现与其它钙网蛋白基因基本生物功能相似。 3.通过双酶切、连接构建Rs—crt的表达载体，将Rs—crt基因成功的克隆到表达载体pET—28a(+)多克隆区域上，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导得到目的融合蛋白pET—28a—Rs—crt的表达，所得的pET—28a—Rs—crt的原核表达为下一步提纯融合蛋白、Western blot、验证蛋白酶活性提供依据。 本实验为在DNA水平上对Rs—crt基因的调控机制研究以及Rs—crt基因及其蛋白产物的相关性质和功能研究奠定了基础；对在分子水平上研究香蕉穿孔线虫的致病机理、与寄主相互作用的关系，对探索和研究香蕉穿孔线虫的防治新途径，具有重要的参考意义。