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本研究在现有方法的基础上优化了色谱条件和样品前处理过程,建立了一种快速、精确的赤霉素(GA3)检测分析方法及简便的样品前处理方法,并对部分市售果蔬样品进行残留量分析检测,为我国制定相关标准、保障食品安全提供参考。另外,本文通过研究GA3对小鼠不同脏器的氧化损伤作用,探讨了GA3对机体的毒作用机制。结果如下:
1.优化的色谱条件;
HPLC条件为键合固定相C18反相柱,紫外检测器,检测波长206nm,流动相为甲醇与7.5mM甲酸水的体积比为4:6的溶液,流速0.4ml/min,柱温40℃,进样量10μL经过反复调试流动相的组成和流速,样品保留时间稳定,具有更好的峰形。
2.样品前处理方法;
采用丙酮-水提取剂结合超声波萃取法提取GA3;并通过石油醚脱色、乙酸乙酯萃取结合C18固相萃取小柱吸附对样品进行提纯。与其他方法相比,除杂效果好,待测样品纯净度高,省时。
3.部分市售果蔬GA3残留情况;
一些早熟果蔬品种和芽菜类GA3残留量较高,黄豆芽和早熟葡萄最为严重,分别达到3.17mg/kg和2.3mg/kg,超出了欧美国家残留标准。
4.GA3对小鼠体质量的影响及对脾脏、肝脏、肾脏和心脏组织的氧化损伤作用;
(1)对脏/体比的影响;
染毒后各组间体质量无显著性差别;788mg/kg bw剂量组肝体系数显著低于溶剂对照组(P<0.05),说明该剂量的GA3对小鼠肝脏有一定的影响;与溶剂对照组相比,染毒组体质量和心、肾体系数无统计学意义;脾体系数随着剂量的增高出现上升趋势,但无统计学意义。
(2)对肝脏和脾脏的影响;
在394和788mg/kg bw剂量条件下,脾脏和肝脏的各氧化应激指标改变明显。脾脏SOD、GSH-Px活性分别比对照组降低了21.01%,29.02%和23.36%,35.03%,肝脏相应指标分别降低了9.01%,13.05%和12.81%,16.17%,经统计学处理差异显著(P<0.05,P<0.01);相同剂量组的MDA含量,脾脏和肝脏分别升高了19.06%,23.61%和22.33%,26.39%,经统计学处理差异显著(P<0.05,P<0.01)。
(3)对肾脏的影响;
394和788mg/kg bw两个染毒剂量,使肾脏SOD、GSH-Px活性有所上升,与对照组相比,分别上升了22.34%和40.20%;MDA含量有所下降,与对照组相比分别下降了35.93%和30.05%。结果均具有统计学意义。
(4)对心脏的影响;
染毒组的各项指标与阴性对照和溶剂对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。
结论:本研究所建立的果蔬GA3残留检测方法线性良好,相关系数大于0.999,平均加标回收率为93.10%,最低检测限为0.012μg/g,一些早熟果蔬品种和芽菜类GA3残留量较高;GA3对小鼠不同组织器官的氧化应激表现不同,对肝脏、脾脏有氧化损伤作用,对心脏作用不明显,对肾脏可能有保护作用。