去光条件下葡萄果皮中VvHY5和VvCOP1的转录和蛋白表达分析

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葡萄果皮颜色是由花青苷的组成和含量决定,是衡量葡萄品质的重要标准之一,直接影响葡萄及其加工产品的经济价值。光是影响花青苷合成的重要因素之一。本研究从坐果期到成熟期,对两个红色欧亚种葡萄‘京秀’和‘京艳’(‘京秀’×绿色‘香妃’)进行去光处理,成熟期‘京秀’果皮为绿色,表明其果皮着色需要光照的诱导,表现为光依赖型;而‘京艳’果皮仍然为红色,表现为非光依赖型。本研究着重分析了VvHY5和VvCOP1的转录表达及VvCOP1蛋白的亚细胞定位,探讨VvHY5和VvCOP1在‘京艳’果皮去光后花青苷合成调控中的作用。VvCOP1和VvHY5的转录表达模式在光依赖型‘京秀’和非光依赖型‘京艳’果皮中一致,即在正常光照条件下从坐果期到成熟期,转录表达量不断上升,成熟期略有下降;去光处理后,VvCOP1转录表达量相对于正常光照下没有显著性差异,VvHY5转录表达量则显著性下降。自然节律条件下,VvCOP1和VvHY5转录表达量对白天和黑夜的响应在两个品种果皮中也一致:VvCOP1转录表达量在白天和黑夜间没有显著性差异,而VvHY5转录表达量在黑夜时显著下降。可见,VvCOP1和VvHY5的转录表达可能不是造成非光依赖型葡萄去光后花青苷合成的原因。葡萄果皮总蛋白Western Blotting实验结果表明,正常照光和去光处理条件下,VvCOP1在‘京秀’和‘京艳’果皮中都有条带表达。VvCOP1蛋白在‘京秀’去光后没有明显变化,而在‘京艳’去光后表达量下降。免疫组化的亚细胞定位进一步表明,‘京秀’和‘京艳’在正常光照时,VvCOP1蛋白主要分布于细胞质中;去光后,‘京秀’VvCOP1蛋白聚集在细胞核,但‘京艳’中VvCOP1蛋白仍主要分布在细胞质中。说明VvCOP1的核质转运可能参与调控非光依赖型葡萄花青苷的合成。
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