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目的:本研究旨在初步探讨Pokemon对人胃癌细胞Smad4的影响及机制。方法:以体外培养的胃癌SGC7901和MGC803细胞为研究对象。1.通过Q-PCR及Western blot技术检测转染Pokemon的人胃癌细胞系中Smad4核酸及蛋白表达水平。2.采用聚合酶链反应(PCR)扩增不同长度的Smad4启动子片段,克隆至p GL4.10-Basic载体中构建p GL4.10-Smad4-Promoter重组表达载体,分别命名为Smad4PP1(366bp)、Smad4PP2(207bp)、Smad4PP3(136bp),提取重组质粒经双酶切、PCR及DNA测序。将构建的重组表达载体、p GL4.10-Basic载体分别与内参质粒PTK共转染SGC7901和MGC803细胞,运用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性;将三种质粒(Pokemon/p GL4.10-Basic、PTK、Smad4PP1/Smad4PP2/Smad4PP3)共同转染至SGC7901和MGC803细胞,采用双荧光素酶报告基因检测方法,检测Pokemon对Smad4启动子转录活性的调节作用。3.将pc DNA3.1质粒(Control组)与Pokemon质粒(Pokemon组)分别转染至胃癌SGC7901和MGC803细胞,流式细胞术(flow cytometry,FCM)测Pokemon对人胃癌干样细胞表面标志物EPCAM+/CD44+的影响。结果:1.Pokemon可抑制人胃癌SGC7901和MGC803细胞Smad4的表达。2.Pokemon可抑制人胃癌SGC7901和MGC803细胞Smad4启动子表达。1)成功构建了Smad4基因启动子荧光素酶报告载体,构建长约366bp、207bp、136bp的3种不同长度p GL4.10-Smad4-promoter,分别命名为Smad4PP1、Smad4PP2、Smad4PP3;2)双荧光素酶报告基因检测结果显示,与p GL4.10-Basic组相比,重组载体Smad4PP1、Smad4PP2、Smad4PP3均具有较强的启动子活性,差异具有统计学意义(P<0.05),且Smad4PP1活性最强。3)双荧光素酶报告基因结果示Pokemon可抑制人胃癌细胞SGC7901和MGC803细胞Smad4启动子的转录活性,差异有统计学意义(P<0.05)。3.流式细胞术示转染Pokemon质粒(Pokemon组)与pc DNA3.1质粒(Control组)相比,人胃癌细胞SGC7901和MGC803细胞增加干样细胞表面标志物EPCAM+/CD44+比率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.Pokemon可抑制人胃癌SGC7901和MGC803细胞Smad4启动子活性下调Smad4的表达2.Pokemon可增加人胃癌SGC7901和MGC803细胞干样细胞表面标志物EPCAM+/CD44+比率