【摘 要】
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本论文对植物RNA分离和Northern杂交分析RNA的方法进行了改进。并研究了质体信号对定位于不同细胞器的核基因表达的调节以及叶片形态建成的影响。 第一部分,建立了一种高
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本论文对植物RNA分离和Northern杂交分析RNA的方法进行了改进。并研究了质体信号对定位于不同细胞器的核基因表达的调节以及叶片形态建成的影响。 第一部分,建立了一种高效经济的植物RNA提取方法。在提取缓冲液中加入蔗糖、氯化钾和镁离子以提供对RNA分子的保护。破碎后的细胞于提取缓冲液中裂解后,用酚/氯仿变性并去除内源RNA酶和其他蛋白质,而后用pH5.6的NaAc沉淀RNA。用该方法提取RNA的得率较高,经电泳检测,RNA的完整性很好。RNA印迹分析和RT-PCR也都得到很好的结果。该方法还使实验成本大大降低。 第二部分,系统地考察了溴化乙锭(ethidium bromide,EtBr)先染RNA对RNA荧光强度产生影响的因素。所得结果显示出,RNA的荧光强度除受先前报道的EtBr浓度影响外,还受变性温度、变性时间和RNA量的影响。由于经EtBr先染的RNA的Northern杂交效率与RNA的荧光强度呈负相关,因而对于一个特定的Northern杂交程序的设计,上述这些影响染色灵敏性的因素必须要同时考虑,以使染色的灵敏性与杂交效率得到很好的结合。当使用异源DNA为探针时,随着RNA样品中EtBr浓度的升高,Northern杂交效率要比用同源RNA探针降低得快。我们提出,对于在分子生物学中经常用到的异源DNA探针与EtBr先染的RNA所作的Northernz杂交,最好的结果是当先染RNA的EtBr浓度不超过30μg/mL。这一浓度要低于使用同源RNA探针时的50μg/mL的EtBr浓度。 第三部分,考察了叶绿体发育缺陷的叶绿素(Chlorophyll,Chl)减少的突
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