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杜仲是名贵的中药材,而且杜仲叶资源丰富。近年来,国内外将杜仲叶大多开发成营养保健品、饲料添加剂等,杜仲叶在2005年正式被收载于《中国药典》以后,它的应用及研究越来越受关注。本文以杜仲叶为物质基础,围绕国家林业经济和社会发展重大需求,以杜仲叶中的车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸成分为研究目标,采用螺旋挤压预处理-超声辅助的方法进行提取,通过响应面设计优化提取工艺,利用大孔树脂对提取液中的车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸进行富集研究。其主要内容如下:1.建立高效液相色谱法同时检测车叶草苷、京尼平昔酸和绿原酸的方法,采用Agilent 5 TC-C18(5m,4.6mm×250mm)色谱柱,检测波长237nm,进样量10μL,流速1mL/min,25℃柱温条件下进行检测。流动相组成及比例:0.5%磷酸水溶液(A):甲醇(B);洗脱梯度:0-40 min,5%-32%(B);40-41 min,32%-60%(B);41-51min,60%(B);51-52min,60%-5%(B);52-60min,5%(B)。2.通过响应面优化提取因素,确定了最佳提取车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的工艺。最佳提取条件:液料比20 mL/g,乙醇体积分数70%,超声频率80 kHz,超声时间40min,超声功率200W,超声温度50℃。车叶草苷的得率为266.78±13.34μg/g,京尼平苷酸的得率为892.37±46.96μg/g,绿原酸的得率为2418.05±53.68 μg/g。车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的纯度分别为1.66%、1.74%和7.79%。3.通过对比 8 种大孔树脂:HPD-600、AB-8、X-5、HPD-400、ADS-17、HPD-80、HPD-450A和D-4020对车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的吸附和解析能力,筛选出HPD-600是车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸富集研究最理想的树脂。大孔树脂HPD-600的最佳吸附参数:吸附温度25 ℃,上样时车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的浓度分别为 16.2 μg/mL、47.9 μg/mL 和 151.4 μg/mL,上样量为 50.4 mL,上样流速为 2 BV/h,上样pH为4,加入氯化钠的质量浓度为2%。树脂对车叶草苷最大吸附量为0.55 mg/g,京尼平苷酸的最大吸附量为1.18mg/g,绿原酸饱和吸附量为4.40mg/g。HPD-600大孔树脂的最佳解析参数:50%的乙醇以2 BV/h进行洗脱。车叶草苷的解析率为81.01%,京尼平苷酸的解析率为90.16%,绿原酸的解析率为95.72%。通过大孔树脂富集车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的纯度分别达到为7.34%、8.01%和39.31%。利用螺旋挤压预处理完全打破植物细胞壁,使目标产物从细胞内出,进行超声提取,随后利用大孔树脂对车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸进行富集以提高其纯度。我们得出结论螺旋挤压预处理-超声辅助提取法是一种新型的、快速、绿色环保、有效并且成本低的方法。