我国是水产品的生产和消费大国,已成为世界水产品行业的支柱,而水产品在养殖、捕捞、储藏、加工、运输、销售等环节容易受到病原微生物的污染,因此病原微生物检测是水产品及其加工品卫生检测中的一项重要工作,其关系到消费者的健康及生命安全。其中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和金黄色葡葡球菌被认为是重要的污染水产品的致病菌,已引起各个国家卫生检测部门及疾病控制中心的广泛重视。我国标准DB11/519-2008《生食水产品卫生要求》规定致病菌不得检出。然而传统致病菌检测方法存在检测时间长,一般检测周期在5-10天,检测程序繁琐,工作量大等缺点,因此亟需建立一种操作简便、快速准确、灵敏度和特异性都较高的现代化检测方法,以满足现代化食品安全快速检测的需要。本研究旨在利用多重PCR技术系统地建立水产品及其加工制品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和志贺氏菌四种常见食源性致病菌的快速检测方法,对此方法进行优化和评价,并基于此方法开发出可用于实际水产品及其加工制品的目标致病菌检测的sssv m-PCR检测试剂盒,具体实验内容和结果如下：1.设计制备一种能够同时富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的复合共增菌培养基sssv,用于水产品中上述常见四种食源性致病菌的同时快速增菌。以缓冲蛋白胨水为基础培养基,通过挑选适合的促进剂、抑制剂及营养物质进行单因素试验和正交试验,确定其最佳成分及配比;分析了sssv培养基对目标菌的生长选择性及生长特性,并通过Gompertz方程构建生长模型,获得四种目标菌在SSSV中的对数生长率(EGR)、传代时间(GT)、停滞期(LPD)及最大菌落密度(MPD)四个生长特性参数：通过人工污染试验,分析了sssv对不同贮藏条件下的水产品中目标致病菌的修复能力,最后比较了sssv与营养肉汤及国标中各自选择性增菌液对实际水产样品的检测效果。结果表明,获得的共增菌培养基sssv对非目标菌表现出一定的抑制性,能同时富集不同接种比例组成的混合菌,37℃培养8h后,菌体浓度均可达到104-107CFU/mL; SSSV能有效修复冷藏和冻藏水产品中冷受伤的目标致病菌,人工污染102CFU/mL目标菌的冷藏和冷冻虾仁、目鱼卷及鱼丸样品经SSSV培养基在37℃分别培养8h和12h可使菌体浓度达到105-106CFU/mL; SSSV对实际水产样品中四种致病菌的增菌效果优于营养肉汤,但略差于国标中目标菌各自选择性增菌液。2、筛选出金黄色葡萄球菌(Slaphylococcus aureus)的耐热核酸酶基因nuc、沙门氏菌(Salmonella spp.)的侵袭蛋白基因invA、志贺氏菌(Shigella spp.)的侵染性质粒抗原H基因ipaH和副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolylicus)的毒力表达调控基因loxR作为目标靶基因并设计相应引物对,建立并优化了一种快速检测水产品中上述四种常见食源性致病菌的多重PCR方法。结果显示,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌及副溶血性弧菌的多重PCR扩增片段产物大小分别为549bp、426bp、348bp、243bp,通过序列测序及BLAST比对证明了扩增产物的准确性；该检测方法具有良好的特异性和灵敏度,四种目标菌的检测限分别为志贺氏菌和金黄色葡萄球菌102CFU/mL,沙门氏菌和副溶血性弧菌为101CFU/mL。 SSSV富集培养与该多重PCR方法联用,对50份实际水产样品进行检测,并与国际方法对比验证得出,四种敛病菌的整体检测符合率达97%以上,两种检测方法无显株性差异(P>0.05),但检测时间大幅缩短,可在24h内完成样品的检验。3、实现了对上述多重PCR检测方法的产品化组装,开发成适合快速检测水产品中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的检测试剂盒SSSV m-PCR Kit。对该试剂盒的保存方式,稳定性及重复性进行了测定和评价。结果表明,该实际盒检测效果稳定,可重复性好,4。C保存条件下最长可30d-60d,在-20℃或-80℃条件保存,其保质期可接近或达到一年,但试剂的反复冻融对试剂盒的检测效果影响较大,使用者应该根据实际检测需求选择适合的保存方式。