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微水相酶催化合成技术具有条件温和、专一性强、成本低、溶剂和催化剂可重复利用、合成产物高光学纯度高等优点。肌肽(β-Ala-L-His)是一种高效抗氧化剂,广泛应于在生物、化工、医药等领域,是一种具有开发前景的生物活性肽,成为国内外研究开发的热点。本文研究了用正丁醇或四氢呋喃(THF)为溶剂,以L-组氨酸或4,5-二羧酸咪唑及L-丙氨酸(L-Ala)为底物,α-胰凝乳蛋白酶催化合成肌肽及肌肽类似物,分析验证合成产物的光谱、波谱、TLC等数据,系统考察合成肌肽及其类似物的工艺条件,在此基础上通过正交试验获取了合成肌肽类似物的最适条件。实验结果表明:在正丁醇微水相及THF微水相中,α-胰凝乳蛋白酶能分别催化合成肌肽及其类似物。合成物在TLC硅胶G60上出现一个新斑点;紫外分析指出在240、310、330nm出现吸收峰;高效液相色谱的保留时间为4.25min;1氢核磁共振图谱有五组峰。由此证实该产物为5-丙氨酰胺-4-羧酸-咪唑。研究肌肽类似物的单因素试验结果指出,35℃时产率为20.0%;反应70min达到平衡,产率为46.4%。光照对肌肽类似物产率没有影响。α-胰凝乳蛋白酶在pH 7.5～9.5内维持较高活性,最适pH8.5,产率为55%。在4,5-二羧酸咪唑:L-丙氨酸=1:1时,加入4%(M%)α-胰凝乳蛋白酶,产率为44.5%;含水量为10%,产率为42.3%。4,5-二羧酸咪唑:L-丙氨酸=1.5:1,产率达到45.4%。L25(65)正交实验结果指出,含水量、时间、底物比例、温度和pH显著影响肌肽类似物的产率,其中温度和pH值达到极显著。合成肌肽类似物的最适条件是:在THF:蒸馏水=1:0.16微水相中, 4,5-二羧酸咪唑:L-Ala=1:3,酶加入量为底物量的1%,35℃反应1.5h,肌肽类似物的产率为63.4%。在正丁醇:pH8.0磷酸缓冲溶液=1:0.08微水相中,L-His:L-Ala=1:1,酶加入量为底物量的3%,40℃反应1.5h,肌肽合成产率达到14.7%;在正丁醇:蒸馏水=1:0.08的微水相中,按上述条件合成肌肽,其产率达到88.8%。