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目的:本实验通过观察肾虚质大鼠基本生理状况的变化,以及左归丸、右归丸对肾虚质大鼠空间学习记忆能力的影响,从分子生物学角度探讨大鼠海马区5-HT1A、5-HT2A蛋白表达的变化与大鼠空间学习记忆能力下降的相关性,以及左归丸、右归丸干预改善肾虚质大鼠空间学习记忆能力下降的作用机制,从而为临床亚健康状态的改善及轻度认知功能障碍的防治提供参考依据。
方法:将购回的26只SPF级12周龄健康大鼠(雌鼠16只,雄鼠10只),雌雄分开适应性喂养一周无异常后,进行合笼交配。受孕成功后,将孕鼠分为空白孕鼠组(4只)和肾虚质孕鼠组(12只)。对肾虚质孕鼠组进行土猫恐吓,直至产仔,空白孕鼠组不予恐吓。将所有仔鼠饲养至4周后,从空白孕鼠组所产仔鼠中随机选取20只作为空白对照组,从肾虚质孕鼠组所产仔鼠中随机选取60只分为肾虚质模型组、左归丸组、右归丸组,每组各20只,每日对这三组仔鼠进行土猫恐吓,连续12周。同时对左归丸组、右归丸组分别给予左归丸、右归丸药液进行干预治疗。造模成功后,对实验仔鼠进行Morris水迷宫实验、免疫组织化学法实验、酶联免疫吸附法(ELISA)实验,观察各组仔鼠之间空间学习记忆能力的差异性,并检测各组海马区5-HT1A、5-HT2A蛋白表达的情况。
结果:①Morris水迷宫实验:与空白对照组比较,肾虚质模型组逃避潜伏期、航行总路程及首次穿越目标时间明显延长,在目标区域停留时间明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);与肾虚质模型组比较,左归丸组、右归丸组逃避潜伏期、航行总路程及首次穿越目标时间有所缩短,在目标区域停留时间有所延长,差异有统计学意义(P<0.05);左归丸组、右归丸组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②免疫组织化学法:与空白对照组比较,肾虚质模型组5-HT1A阳性反应点密度值明显增大,5-HT2A明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05);与肾虚质模型组比较,左归丸组、右归丸组5-HT1A阳性反应点密度值有所减小,5-HT2A有所增大,差异有统计学意义(P<0.05);左归丸组、右归丸组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。③ELISA法:与空白对照组比较,肾虚质模型组5-HT1A蛋白光密度值(OpticalDensity,OD值)明显上调,5-HT2A明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);与肾虚质模型组比较,左归丸组、右归丸组5-HT1AOD值有所下调,5-HT2A有所上调,差异有统计学意义(P<0.05);左归丸组、右归丸组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:通过研究发现,肾虚质大鼠空间学习记忆能力的减退,可能与海马区相关蛋白5-HT1A表达上调、5-HT2A表达下调有关。补肾方药左归丸和右归丸干预治疗后,可改善学习记忆能力下降的情况,并恢复5-HT1A、5-HT2A蛋白的正常表达。
方法:将购回的26只SPF级12周龄健康大鼠(雌鼠16只,雄鼠10只),雌雄分开适应性喂养一周无异常后,进行合笼交配。受孕成功后,将孕鼠分为空白孕鼠组(4只)和肾虚质孕鼠组(12只)。对肾虚质孕鼠组进行土猫恐吓,直至产仔,空白孕鼠组不予恐吓。将所有仔鼠饲养至4周后,从空白孕鼠组所产仔鼠中随机选取20只作为空白对照组,从肾虚质孕鼠组所产仔鼠中随机选取60只分为肾虚质模型组、左归丸组、右归丸组,每组各20只,每日对这三组仔鼠进行土猫恐吓,连续12周。同时对左归丸组、右归丸组分别给予左归丸、右归丸药液进行干预治疗。造模成功后,对实验仔鼠进行Morris水迷宫实验、免疫组织化学法实验、酶联免疫吸附法(ELISA)实验,观察各组仔鼠之间空间学习记忆能力的差异性,并检测各组海马区5-HT1A、5-HT2A蛋白表达的情况。
结果:①Morris水迷宫实验:与空白对照组比较,肾虚质模型组逃避潜伏期、航行总路程及首次穿越目标时间明显延长,在目标区域停留时间明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);与肾虚质模型组比较,左归丸组、右归丸组逃避潜伏期、航行总路程及首次穿越目标时间有所缩短,在目标区域停留时间有所延长,差异有统计学意义(P<0.05);左归丸组、右归丸组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②免疫组织化学法:与空白对照组比较,肾虚质模型组5-HT1A阳性反应点密度值明显增大,5-HT2A明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05);与肾虚质模型组比较,左归丸组、右归丸组5-HT1A阳性反应点密度值有所减小,5-HT2A有所增大,差异有统计学意义(P<0.05);左归丸组、右归丸组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。③ELISA法:与空白对照组比较,肾虚质模型组5-HT1A蛋白光密度值(OpticalDensity,OD值)明显上调,5-HT2A明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);与肾虚质模型组比较,左归丸组、右归丸组5-HT1AOD值有所下调,5-HT2A有所上调,差异有统计学意义(P<0.05);左归丸组、右归丸组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:通过研究发现,肾虚质大鼠空间学习记忆能力的减退,可能与海马区相关蛋白5-HT1A表达上调、5-HT2A表达下调有关。补肾方药左归丸和右归丸干预治疗后,可改善学习记忆能力下降的情况,并恢复5-HT1A、5-HT2A蛋白的正常表达。