背景:瘢痕疙瘩是由创伤、烧伤、手术等引起的皮肤深部损伤而出现的纤维增殖性疾病。无论是在美观上,还是在功能(如挛缩)或者是在主观感受上(包括瘙痒症),都影响患者的生活质量。相关研究很多,但其形成的机制尚未确立,预防和治疗策略仍不尽人意。鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和其上游主要负责其生产的关键酶——鞘氨醇激酶1(SphK1)在多种人类疾病中被广泛研究,包括各种实体癌症,肌肉挛缩,炎症性病,神经疾病,年龄相关性黄斑变性(AMD)及纤维化疾病,但是作为类肿瘤和纤维化特性的瘢痕疙瘩截至目前几乎没有相关文献报道。本实验设计为探讨瘢痕疙瘩与SphK1/S1P通路及纤维化的关系,借助肿瘤学研究成果,为瘢痕疙瘩新的治疗靶点提供依据。目的:本研究通过检测SphK1和S1P在组织学和细胞学中的表达差异,分析探讨SphK1/S1P通路与瘢痕疙瘩的相互关系;探讨S1P基因沉默对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖迁移的影响及沉默后纤维化相关蛋白的表达,进一步为揭示瘢痕疙瘩治疗靶点提供依据与实际价值。方法:1、选取2016年5月至2017年12月于延边大学附属医院就诊的瘢痕疙瘩患者手术标本及外科手术患者的正常皮肤标本,制备石蜡标本和进行原代细胞培养。2、选取制备的石蜡标本,做HE染色,并利用免疫组织化学法检测组织中SphK1和S1P的表达差异。3、取3-10代成纤维细胞进行细胞学实验,利用蛋白质印迹检测原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常成纤维细胞中SphK1和S1P的表达差异。4、利用小干扰RNA技术沉默瘢痕疙瘩成纤维细胞中S1P序列,并通过Western blot检测其沉默效果,筛选出转染效率最高的基因序列。5、检测沉默后纤维化相关蛋白α-SMA及Collagen type Ⅲ表达水平。6、通过细胞划痕实验检测S1P基因沉默对细胞迁移的影响。结果:1、选取成功培养的原代细胞及成功制作的蜡块标本进行实验。2、免疫组化法检测显示在组织中,瘢痕疙瘩组与正常皮肤组比较,SphK1及S1P均表达上调。3、蛋白质印迹法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中SphK1与正常成纤维细胞比较表达无显著差异,瘢痕疙瘩成纤维细胞中S1P较正常成纤维细胞表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。4、3链明显有沉默效果,并且在100 nmol浓度、转染24h条件下沉默效果最明显,S1Psi-RNAl、2、3链转染组蛋白分别下调了 34.7%,20.1%,43.8%,均有差异(P<0.05)。5、沉默后纤维化相关蛋白α-SMA及Collagen typeⅢ表达水平均下调(P<0.05)。6、划痕实验于0h,24h及48h观察统计,表明细胞迁移距离随t递增逐渐缩短(P<0.05)。在24h实验组及对照组迁移距离差异最大(P<0.05)。结论:1.SphK1/S1P轴在瘢痕疙瘩中表达升高,其中S1P与纤维化相关,并促进细胞迁移。2.SphK1/S1P通路对控制瘢痕疙瘩纤维化有干预效果,可能未来作为新的治疗靶点,应该进一步研究。