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嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila HB310(Xn HB310)属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae),与小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)HB310共生。前期研究发现Xn HB310具有广谱的杀虫和抑菌活性,该菌在离体培养过程中能产生多种杀虫毒素和抑菌活性物质,其中包括几丁质酶。为了明确共生菌中几丁质酶的特性和功能,本研究根据Gen Bank中已知基因chi60(登录号:KC701470)和chi70(登录号:KC701471)序列,设计引物克隆获得目的基因并进行原核表达,并对表达重组蛋白的生物活性进行了研究。现将主要结果总结如下:1、构建chi60基因和chi70基因的原核表达载体p ET-28a-chi60和p ET-28a-chi70。将其转入到表达感受态Escherichia coli Transetta(DE3)中,成功表达出重组蛋白Chi60和Chi70。对原核表达的诱导条件进行优化,chi60在37℃、30℃、28℃、25℃和16℃条件下的表达产物都以包涵体沉淀的形式存在,IPTG浓度为0.5m M时,包涵体表达量最高;chi70在诱导温度为28℃、IPTG浓度为0.5m M时,可以表达出大量的可溶性重组蛋白。2、利用DNS法对重组蛋白Chi60和Chi70活性进行检测,结果表明,在42℃,重组蛋白Chi60和Chi70的外切几丁质酶活性分别为0.71U/m L和1.59U/m L,内切几丁质酶活性为分别29.66U/m L和44.93U/m L,表明这两种几丁质酶都是内切几丁质酶。重组几丁质酶Chi60和Chi70的最适温度和最适p H值分别为50℃和6.0。3、测定了重组蛋白Chi60和Chi70对Bt HD-73的增效作用。结果表明重组几丁质酶Chi60的复性产物没有增效作用,重组蛋白Chi70与Bt HD-73的混合制剂对棉铃虫2龄幼虫的LC50显著高于单独使用Bt HD-73,具有增效作用。4、抑菌活性的测定结果表明,重组蛋白Chi70对棉花黄萎病和白菜黑斑病表现出了明显的抑菌活性,而经变性-复性后的重组蛋白Chi60对两种病原真菌没有表现出抑菌活性。