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精子顶体是一种膜系细胞器,呈帽状罩于细胞核的前方,顶体内含多种水解酶,如透明质酸酶、放射冠分散酶、顶体酶、芳基硫酸脂酶等。顶体反应(acrosomereaction,AR)是精子与卵透明带结合之后,精子质膜与顶体外膜融合,释放一系列酶的过程。透明质酸酶主要功能是溶解卵丘细胞间透明质酸、分散卵丘细胞、辅助精子通过卵丘细胞间隙;放射冠分散酶:顾名思义,主要功能是使放射冠的细胞松散;顶体酶:存在于顶体内膜及赤道部膜上,通常以无活性形式存在,当精子头部进入卵透明带时,顶体酶原才被激活为顶体酶,水解透明带糖蛋白,辅助精子穿过透明带;芳基硫酸脂酶的作用是溶解卵黄膜。 受精过程是来自父母双方的原核融合形成新的个体的过程,包括以下几个步骤:①精子穿入卵丘,②精子与透明带相互作用,③精子—卵子膜融合,④卵子激活,⑤精子细胞核染色体的解凝及原核形成,⑥母源性和父源性原核发育及转移到卵母细胞中心,⑦在第一次有丝分裂的纺锤体轴线上发生双原核融合。精子顶体酶总活性及精子顶体反应在受精过程中发挥重要作用。但是目前评估精子质量的方法主要是根据第五版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》的精子形态,浓度,活动力的标准。由于这个标准是一个描述性的标准,且存在一定的主观性,而精子的功能对于精子受精能力十分重要,因此,目前研究开始注重评估精子的功能。 精子顶体反应、精子顶体酶总活性都是精子功能的重要方面之一,本研究主要通过比较钙离子载体A23187诱发的精子顶体反应率、精子顶体酶总活性与与精子浓度、前向运动精子百分数、正常形态精子百分数及受精率、优胚率、可移植胚胎率之间的关系,比较顶体反应率及顶体酶总活性在评估男性生育力及体外受精结局的价值。 第一部分精子顶体反应率、顶体酶总活性与精液参数的相关性研究 【研究目的】 1、探讨钙离子载体A23187诱发的精子顶体反应率是否与精液分析中的精子浓度、形态、活动力相关。 2、探讨顶体酶总活性是否与精液分析中的精子浓度、形态、活动力相关。 3、比较钙离子载体A23187诱发的精子顶体反应率及顶体酶总活性反映精子质量的准确性。 【材料方法】 1、采用计算机辅助精子分析系统(CASA)进行精子浓度及活动力分析。 2、采用巴式染色法评估精子形态。 3、采用分光光度计检测精子顶体酶总活性。 4、采用Percoll密度梯度离心+上游法制备精子,采用钙离子载体A23187在体外诱发精子顶体反应。 5、采用SPSS18.0统计软件进行Spearman相关分析。 【结果】 1、本研究中,精子顶体反应率与精子浓度、前向运动精子百分数、正常形态精子百分数之间均无相关性,P>0.05。精子顶体反应率与畸形精子指数之间呈负相关,r=-0.183,P<0.05。 2、本研究中,精子顶体酶总活性与精子浓度、前向运动精子百分数、正常形态精子百分数均呈正相关,相关系数分别为0.172,0.306,0.222,P<0.05。精子顶体酶总活性与畸形精子指数无相关性,P>0.05。 【结论】 1、钙离子载体A23187在体外诱发的精子顶体反应率可能不是反映精子质量的良好指标。精子畸形可能影响精子发生顶体反应。 2、精子顶体酶总活性可能是反映精子质量的良好指标之一,具有快速、客观、简单、价廉的优点。 3、精子顶体酶总活性与钙离子载体A23187在体外诱发的精子顶体反应率相比较,前者可能更能反映精子的质量。 第二部分精子顶体反应率、顶体酶总活性与体外受精结局的关系研究 【研究目的】 1、评估钙离子载体A23187诱发的精子顶体反应率与体外受精结局的相关性。 2、评估精子顶体酶总活性与体外受精结局的相关性。 3、比较钙离子载体A23187诱发的精子顶体反应与顶体酶总活性预测体外受精结局的价值。 【材料方法】 1、收集取卵日授精后剩余的男方精液样本,用钙离子载体A23187在体外诱发精子顶体反应。 2、收集IVF-ET治疗患者的相关资料。 3、应用统计软件SPSS18.0及采用Spearman相关分析,T-test统计方法的统计方法,进行分析钙离子载体A23187诱发的精子顶体反应率、精子顶体酶总活性与体外受精结局的相关性。 【结果】 1、本研究中,钙离子载体A23187在体外诱发的精子顶体反应率与受精率、优胚率、可移植胚胎率之间无相关性,P>0.05。 2、本研究中,精子顶体酶总活性与IVF受精率、优胚率、可移植胚胎率无相关性,P>0.05。 【结论】 1、钙离子载体A23187诱发的顶体反应预测男性生育力及IVF结局的价值低。 2、顶体酶总活性可能是预测男性生育力的良好指标之一,可用于预测IVF妊娠结局,但准确性较低。 3、钙离子载体A23187诱发精子顶体反应的临床应用价值可能并不比精子顶体酶总活性的高。