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目的:结直肠癌是目前世界范围内严重危害人类身心健康的常见恶性肿瘤之一,其发生发展等多种生物学行为受到环境和基因调控的影响。临床中对结直肠癌的治疗手段中除了核心的外科手术,术后辅助化疗、新辅助放化疗、靶向治疗等治疗方式都在快速的发展。化疗手段中奥沙利铂作为最常见的一线化疗药物之一,其疗效和预后一直备受关注。近年来,随着对非编码RNA研究的深入,LncRNA成为了新的基因科学热点,并且不断有研究证实Lnc RNA的异常表达可以与多种肿瘤的发病、侵袭、转移甚至耐药性方面产生影响。那么,在现有的结直肠癌化疗药物研究的基础上,结合LncRNA的调控机制进行更精确的研究变得具有重要的意义,明确分子机制的同时还可以对临床个体化治疗和预后评估带来有效的帮助。研究方法:本研究随机选取了157例中国医科大学附属第一医院肛肠外科接受结直肠癌手术和术后奥沙利铂系统化疗的患者样本,对他们的肿瘤组织和癌旁组织进行Loc554202的原位杂交实验并评估表达水平,与样本的各临床病理参数和随访的预后生存情况进行统计分析发掘Loc554202的表达水平对奥沙利铂化疗预后生存的关联。选取结直肠癌细胞的奥沙利铂细胞株HCT116、SW480和对应的耐药细胞株HCT116/L和SW480/L进行比对表达情况的差异,同时通过转染cDNA-Loc554202和shRNA-Loc554202构建HCT116、SW480的Loc554202过表达和HCT/L和SW480/L的Loc554202沉默细胞模型,通过qRT-PCR确认了Loc554202的过表达和沉默表达效率。细胞模型构建成功后,通过CCK-8实验检测干扰Loc554202表达后,对细胞奥沙利铂耐药性的影响。为了探讨Loc554202影响肿瘤细胞耐药性的机制,通过在干扰Loc554202表达的细胞模型中qRT-PCR方法和Western Blot方法寻找其经典内含子RNA mi R-31表达水平的差异,筛选受到调控表达水平改变的mRNA。从而明确宿主基因Loc554202对miR-31的调控和发现ABCB9可以是解释Loc554202的调控作用机制的关键因子。最后通过转染mimic-miR-31和inhibitor-mi R-31构建miR-31的HCT116和SW480的miR-31过表达和HCT116/L和SW480/L的miR-31沉默细胞模型,qRT-PCR方法和Western Blot方法验证干扰miR-31表达水平后,验证肿瘤细胞中ABCB9的差异表达,并通过Lucifer萤光素酶报告分析实验验证miR-31与ABCB9在3’-UTR区的结合,并用恢复性实验验证,解释Loc554202通过miR-31调控ABCB9影响结直肠癌细胞对奥沙利铂耐药性中的原理机制。结果:1、通过原位杂交实验发现,相比于正常肠粘膜组织中的表达情况64.16±28.95(0-117),Loc554202在结直肠癌中棕黄色染色程度更深,表达水平更高155.24±59.94(7-256)。在结肠癌和病理类型为腺癌的患者中同样存在这种表达水平差异。(P<0.05)2、Loc554202在结直肠癌中的表达水平与奥沙利铂化疗的肿瘤患者预后DFS和OS生存期存在负相关。Loc554202高表达的患者预后DFS生存期为40.63±4.52月,OS生存时间为56.19±3.99月;低表达的患者预后DFS生存期为56.25±4.85月,OS生存时间为67.12±4.29月。这种预后相关性在腺癌的DFS生存期和结肠癌患者中也同样存在,同时COX多因素分析认为Loc554202的表达水平是影响奥沙利铂化疗患者,是结肠癌患者的生存期的独立影响因子。(P<0.05)3、实验发现Loc554202和miR-31在耐药肿瘤细胞HCT116/L和SW480/L中高表达(P<0.01)。干扰Loc554202成功构建HCT116和SW480中Loc554202过表达、HCT116/L和SW480/L中Loc554202沉默的细胞模型后mi R-31的表达水平受到Loc554202表达改变的正向调控。同时,ABCB9的表达量在Loc554202差异表达后受到负调控。4、干扰Loc554202表达的细胞模型对奥沙利铂的疗效耐药性改变,Loc554202可以增强肿瘤细胞对奥沙利铂的耐药性,降低药物对肿瘤的作用。5、构建miR-31在HCT116和SW480中过表达、HCT116/L和SW480/L中沉默的细胞模型中ABCB9受到反向调控作用。Lucifer萤光素酶实验验证miR-31与ABCB9的mRNA在3’-UTR区存在结合。6、通过恢复性实验,在HCT116和SW480中过表达Loc554202后ABCB9的表达水平受到抑制,再用inhibitor-miR-31将miR-31沉默之后,ABCB9的表达水平反弹升高,所以证实了Loc554202可以通过改变miR-31调节ABCB9的表达水平,从而影响结直肠癌对奥沙利铂的耐药性。结论:1、Loc554202在结直肠肿瘤组织中高表达,与奥沙利铂化疗患者的预后生存期相关。2、Loc554202和miR-31在耐药细胞中高表达,并且干扰Loc554202可以改变miR-31的表达水平和奥沙利铂对抗肿瘤的疗效。3、Loc554202可以通过改变miR-31的表达水平,影响miR-31与ABCB9的3’-UTR区结合剪切作用,从而影响耐药性。