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为了初步探索酶解鸡蛋清蛋白产生的小(寡)肽混合物是否具有免疫调节作用及其调节机体免疫功能的机理,本研究在筛选适宜酶解条件并制备酶解鸡蛋清小(寡)肽混合物基础上,考察了不同鸡蛋清小(寡)肽混合物对健康小鼠体外免疫功能的影响,选出免疫增强效果较优的小(寡)肽混合物,研究其对免疫功能正常和免疫力低下小鼠体内免疫功能的影响,并初步探索鸡蛋清小(寡)肽混合物影响机体免疫功能的机理。本研究包括以下四个部分。 第一部分 蛋白酶酶解条件筛选 试验一 7种蛋白酶适宜条件筛选 酶解温度、pH、酶量(酶水平)、底物浓度和酶解时间是影响蛋白酶酶解效果的主要因素。为了筛选出适宜的酶解条件,本试验采用单因素试验设计,以氮溶指数(Nitrogen Solution Index,NSI)、水解度(Degree of Hydrolysis,DH)(包括DH1和DH2)和苦味值为标识,按酶解温度(T,℃)、pH、酶量([E]/[S],w/w)、底物浓度([S],w/v)和酶解时间(t,min)逐一递进的方式分别对碱性蛋白酶(Alcalase,AL)、酸性蛋白酶(Acidic Protease,AP)、风味酶(Flavourzyme,FL)、As.1398中性蛋白酶(As.1398 NeutalProtease,NP)、木瓜蛋白酶(Papain,PA)、胃蛋白酶(Pepsin,PE)和胰蛋白酶(Trypsin,TR)酶解鸡蛋清蛋白的适宜酶解条件进行筛选。结果表明: (1)酶解温度、pH、酶量、底物浓度和酶解时间均明显影响所试7种蛋白酶酶解鸡蛋清蛋白的效果; (2)所试7种蛋白酶酶解鸡蛋清蛋白的效果存在明显差异,以FL为最优,而AP和NP较差。 试验二 10种双酶组合适宜条件筛选 在试验一基础上,采用L9(34)正交试验设计,以DH(DH1)和苦味值为标识,在固定试验一筛选出的适宜底物浓度(均为4%)、酶解温度和pH的条件下,筛选基于畜禽(人)消化道前后段的pH有差异而设计的5种“PE+X”和5种“AP+X”共10种双酶组合中(X代表AL、FL、NP、PA或TR),3个因素(酶解时间、PE或AP酶量和AL等其它5种蛋白酶酶量)各自3个水平的不同组合酶解鸡蛋清蛋白时的适宜条件。结果表明: (1)酶解时间及PE或AP的酶量是影响10种双酶组合酶解鸡蛋清蛋白效果的主要因素。5种“PE+X”组合的酶解效果普遍优于相应的5种“AP+X”组合,且10种双酶组合的酶解效果以“PE+FL”最优,而“AP+NP”和“AP+TR”较差。 (2)以DH和苦味值为标识,10种双酶组合中多数双酶组合的酶解效果并不优