研究背景肺动脉高压是一种表现为血液流经肺循环引起的压力升高和肺血管阻力增加的严重的心血管和肺部疾病。其中,低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖已被证明是引起肺动脉高压的重要机制之一。目前,已经有多项研究证明,与肺动脉高压发生发展有关的分子中也包含了长链非编码RNA。本课题的目的是探讨Lnc RNA DANCR在低氧诱导大鼠PASMCs增殖中的作用,及其是否通过调控PLK1介导低氧诱导大鼠PASMCs的增殖。研究方法我们选择SPF级别的Sprague-Dawley雄性大鼠原代培养肺动脉平滑肌细胞作为本研究的细胞模型。经过传代和免疫细胞化学染色鉴定后,采用21%、10%、5%、3%、1%的氧浓度,把大鼠肺动脉平滑肌细胞放到各培养环境12、24、48以及72小时后,采用MTT和CCK-8检测大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖情况,确定构建低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖模型的条件。通过WB检测大鼠肺动脉平滑肌细胞中HIF-1α的表达从而验证低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖模型构建是否成功。通过PCR和WB检测低氧组和常氧组大鼠PASMCs中Lnc RNA DANCR和PLK1的表达,证明两个分子在低氧组和常氧组中存在表达差异。向大鼠PASMCs中转染Lnc RNA DANCR和PLK1的过表达质粒和si RNA,通过MTT和CCK-8检测大鼠PASMCs的增殖情况来验证Lnc RNA DANCR和PLK1对低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的调节作用;通过PCR和WB检测Lnc RNA DANCR和PLK1的表达,检验Lnc RNA DANCR和PLK1之间的调控关系。研究结果原代大鼠肺动脉平滑肌细胞培养成功,通过免疫细胞化学染色鉴定证实为肺动脉平滑肌细胞;经不同氧浓度处理12、24、48、72小时后,MTT检测发现在1%氧浓度条件下,大鼠PASMCs的增殖情况明显增强,通过CCK-8法检测仍得到相同结果,因此,后续实验以1%氧浓度处理48小时作为处理大鼠肺动脉平滑肌细胞的条件。分别过表达和沉默大鼠肺动脉平滑肌细胞中的Lnc RNA DANCR发现,Lnc RNA DANCR过表达组的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖情况明显增强,而沉默组增殖情况明显减弱;过表达Lnc RNA DANCR组的大鼠PASMCs中的PLK1表达明显上调,而沉默组的表达则明显减少。我们也分别过表达和沉默大鼠PASMCs中PLK1的表达,MTT和CCK-8检测后发现PLK1过表达可促进低氧条件下大鼠PASMCs的增殖。研究结论综合研究结果可知,低氧可促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖;这一过程中,Lnc RNA DANCR发挥着正向调节的作用,而且可以通过调控PLK1的表达介导大鼠PASMCs的增殖。