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TRIzol法提取40℃热应激1h小鼠肝脏总RNA，根据Genbank中小鼠Hsp70 cDNA序列设计引物，用RT-PCR方法克隆了昆明小鼠Hsp70 cDNA全长序列并对其进行序列和分子进化分析。同时将体外培养至囊胚的小鼠胚胎分为7组，每组50枚。其中，40℃热应激3组，38℃热应激3组，分别应激1h，2h，3h，然后在37℃条件下分别恢复3h，2h，1h；对照1组，37℃培养4h，每组进行三个重复，然后提取胚胎细胞内总RNA，根据所测序列和Genbank发表序列设计引物，18S rRNA引物作为内参，用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法检测热应激小鼠囊胚内Hsp70 mRNA的表达水平。试验结果如下：1．用RT-PCR方法成功克隆了1926bp的Hsp70 cDNA全长序列，与Genbank已发表序列经BLAST分析同源性为99.3％，共有13个位点发生突变，导致氨基酸残基7处发生替换，氨基酸列同源性为98.8％，但是蛋白质等电点无变化，为5.516。蛋白二级结构分析显示，α-螺旋占39％，β-折叠占10％，Turn(转角)占6％，Coil(无规则卷曲)占45％。2．用DNAStar protean软件对小鼠Hsp70与其他各动物物种Hsp70进行分子进化分析显示，小鼠Hsp70与大鼠Hsp70-1A，Hsp70-1B，Hsp70，牛Hsp70-1A，Hsp70-1B，人Hsp70-1A，Hsp70-1B，狗Hsp70同源性较高，与其他物种同源性相对较低，与山羊Hsp70同源性仅为81.1％。3．用18s rRNA做内参对小鼠热应激囊胚内Hsp70 mRNA的表达进行半定量分析显示，各试验组，包括对照组都有Hsp70基因的表达，其中，38℃热应激组的小鼠囊胚在热应激开始1h后，细胞内Hsp70 mRNA水平无明显变化，热应激2h后Hsp70 mRNA达到较高水平，之后下降；40℃热应激组在热应激开始1h后小鼠囊胚细胞内Hsp70 mRNA就达到较高水平，为对照组的5.893倍，之后随热应激时间延长而下降。4．以18S rRNA做外标，用实时荧光定量RT-PCR定量分析了小鼠囊胚细胞内Hsp70 mRNA的变化水平，结果显示，38℃1h热应激组的Hsp70 mRNA较对照组略有增加，仅增加4.59倍，热应激2h后达到较高水平，是对照组的137.19倍，然后开始迅速下降，热应激3h后，下降到对照组的29.86倍。40℃热应激1h后，胚胎细胞内Hsp70 mRNA是对照组的103.97倍，然后随应激时间的延长开始下降，到热应激2h和3h后分别下降至对照组的51.98倍和27.86倍。上述结果说明，小鼠囊胚对热应激敏感，轻度、短时间微热应激即可启动小鼠囊胚诱导型Hsp70基因高水平表达。在38℃和40℃热应激条件下，胚胎细胞内Hsp70 mRNA分别在热应激开始后2h和1h达到较高水平。