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背景生殖系统炎症是女性常见病、多发病。包括外阴炎、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎,输卵管炎及盆腔结缔组织炎等。阴道炎在女性生殖系统疾病中最为多发,常见的阴道炎有滴虫阴道炎、念珠菌阴道炎病及细菌性阴道病。目前,对于阴道炎的具体的致病机制尚不明确。阴道炎在临床上常见,还是其它疾病,如艾滋病、流产后子宫内膜炎、流产及早产等的危险因素,但是却常被临床医生所忽视。因此,深入研究阴道内菌群失调与各种类型的阴道炎的关系及其致病机制已成为当前女性阴道炎的预防和治疗中急需解决的问题。基于目前国内外尚未见女性阴道炎阴道分泌物中氧化抗氧化物活性与阴道炎发病机制的相关研究,我们利用兰州大学第二附属医院的病例资源：阴道炎患者阴道分泌物,进行阴道分泌物中氧化物含量、抗氧化物活性及其所致的阴道黏膜上皮细胞凋亡相关研究。该研究可为女性阴道炎的治疗和预防提供一定的理论基础。目的本论文探讨三种阴道炎患者阴道分泌物中抗氧化酶、脂质过氧化物、阴道乳酸杆菌的状况及相互关系,利用刮取的女性阴道炎患者的阴道黏膜细胞,研究滴虫阴道炎、念珠菌阴道炎及细菌性阴道病患者阴道分泌物中抗氧化酶活性、脂质过氧化物水平,各类阴道炎患者阴道粘膜细胞的凋亡途径,比较不同类型的阴道炎致阴道粘膜细胞凋亡途径的差异,并探讨阴道分泌物中抗氧化酶活性、脂质过氧化物水平与细胞凋亡的关系。方法1、阴道炎患者阴道分泌物病原菌的检测应用棉拭子获取滴虫阴道炎、念珠菌阴道炎及细菌性阴道病患者阴道分泌物,溶于生理盐水中,用pH试纸法检测阴道分泌物的pH值,用盐水法和分泌物涂片的方法检病原微生物类型及乳酸杆菌的数量。2、阴道炎患者阴道分泌物过氧化物及抗氧化酶活性研究方法：应用棉拭子获取滴虫阴道炎、念珠菌阴道炎及细菌性阴道病患者阴道分泌物,溶于磷酸盐缓冲液中,制成酶检测储备液,应用分光光度计法检测阴道炎分泌物中脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde, MDA)、过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2),以及抗氧化物酶超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase, CAT)及维生素C (Vitamin C、VC)的活性或含量,探讨氧化物、抗氧化物质与阴道pH值、乳酸杆菌含量的关系。3、氧化应激诱导的阴道黏膜细胞凋亡研究方法：利用临床获取的滴虫阴道炎、念珠菌阴道炎及细菌性阴道病患者的阴道黏膜上皮细胞,用间接免疫荧光法、DNA Ladder及免疫印迹(Western blot)法检测三种阴道炎阴道黏膜细胞的细胞活性及凋亡情况。观察阴道炎患者阴道黏膜上皮细胞活性和染色质DNA的变化,检测caspase3、Bcl-2、Bax、Cyto C、Grp78、CHOP、caspase12水平,从而结合第一部分的内容进行综合分析,探讨抗氧化物酶及脂质过氧化物水平的改变与阴道炎患者阴道黏膜上皮细胞凋亡的相关性。结果1、阴道炎患者阴道分泌物病原菌的检测结果1.1对197例细菌性阴道病、念珠菌阴道炎及滴虫阴道炎的分布情况进行分析,发现细菌性阴道炎为66例,占33.5%；念珠菌性阴道炎为73例,占37.05%；滴虫性阴道炎为58例,占29.44%。三种阴道炎的发病率比较接近,但以念珠菌性阴道炎最多。我们还发现三种阴道炎患者的年龄(平均34.5岁)与无阴道炎妇女的年龄(平均35.1岁)无显著差异性。1.2阴道分泌物中pH分析显示：197例阴道炎患者阴道分泌物pH值均大于4.5,pH显著升高,而无阴道炎女性的阴道分泌物pH值绝大部分都小于4.5。三种阴道炎的阴道分泌物中,滴虫阴道炎阴道分泌物pH最高。1.3阴道分泌物中乳酸杆菌检出率分析显示：三种阴道炎阴道分泌物中乳酸杆菌检出率的降低与患阴道炎的危险度成正比,也就是说检出率低就增高了患阴道炎的危险度,且由OR的变化(对照组1.000、细菌性/念珠菌性/滴虫性阴道炎分别为8.784/4.316/16.564)可知阴道乳酸杆菌降低幅度越大,患阴道炎的风险度就越高。滴虫性阴道炎患者检出率最低,为12.07%,其患阴道炎的危险度增加至16.564,位于各类型阴道炎之首。2、阴道炎患者阴道分泌物抗氧化酶活性研究结果：2.1阴道分泌物中脂质过氧化物的分析显示：197例阴道炎患者阴道分泌物中脂质过氧化物MDA水平均显著高于正常对照组,各组之间无显著性。3种阴道炎治疗后,MDA的水平均明显降低,达到了正常对照组水平。三种阴道炎患者阴道分泌物中H202水平显著高于健康女性阴道分泌物中H202水平,组间比较滴虫阴道炎阴道分泌物H202水平显著的高于细菌性阴道病和念珠菌阴道炎H202水平,阴道炎治疗后,H202的水平均明显降低。2.2阴道分泌物中抗过氧化物(酶)分析显示：细菌性阴道病、念珠菌阴道炎、滴虫阴道炎患者阴道分泌物中CA1、SOD、VC水平均显著低于对照组,组间比较,念珠菌阴道炎患者阴道分泌物中CAT活性低于细菌性阴道病患者,其余组间无显著差异。在接受治疗后,各组阴道炎患者阴道分泌物中CAT、SOD、 VC均可恢复至正常水平。3、抗氧化物(酶)与阴道黏膜细胞凋亡研究结果3.1用间接免疫荧光实验(IFA)、蛋白免疫印迹(western blot)实验检测caspase3的活性,发现在细菌性阴道病、念珠菌阴道炎、滴虫阴道炎阴道黏膜细胞中剪切的有活性的caspase3表达大量增加。同时,DNA梯子试验表明与对照组比较,三种阴道炎黏膜上皮细胞的核酸可形成明显的DNA梯子。3.2细菌性阴道病患者阴道黏膜细胞线粒体途径细胞凋亡相关蛋白表达：通过检测线粒体凋亡途径的经典标记蛋白Bcl-2和Bax,结果证实在细菌性阴道炎患者的阴道黏膜细胞Bcl-2表达显著的降低,而Bax的表达显著升高。3.3念珠菌阴道炎、滴虫阴道炎患者阴道黏膜上皮细胞发生内质网应激途径细胞凋亡：蛋白免疫印迹试验证实念珠菌阴道炎、滴虫阴道炎患者阴道黏膜细胞中Grp78、CHOP、活性caspase12的水平与对照组相比均有显著升高。结论1.细菌性阴道病、念珠菌阴道炎和滴虫阴道炎患者阴道分泌物乳酸杆菌的检测率下降、pH值升高,说明三种阴道炎的阴道菌群环境遭到破坏。2.细菌性阴道病、念珠菌阴道炎和滴虫阴道炎患者阴道分泌物中脂质过氧化物MDA和氧化物H202的含量升高,抗氧化物SOD、CAT及VC活性或含量降低,说明三种阴道炎患者受到氧化应激的影响。3.细菌性阴道病患者的阴道黏膜上皮细胞受到线粒体途径的细胞凋亡的影响,念珠菌阴道炎和滴虫阴道炎受到内质网应激途径的细胞凋亡的影响。