【摘 要】
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血液系统恶性肿瘤是当今医学上的顽症之一,细胞膜表面分化抗原(CD)分子的研究能提高对其生物学行为的认识,有利于诊断治疗。通过单克隆抗体(单抗)进而研究细胞膜抗原生物学特
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血液系统恶性肿瘤是当今医学上的顽症之一,细胞膜表面分化抗原(CD)分子的研究能提高对其生物学行为的认识,有利于诊断治疗。通过单克隆抗体(单抗)进而研究细胞膜抗原生物学特性是蛋白质功能研究的重要方法。ZCH(Zhejiang Childrens Hospital)-288a(简称ZCH-288a)是本科研究室自行研制的鼠抗人造血细胞分化抗原的单抗,已经提交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA8)鉴定,根据HLDA8总部经大量研究的反馈信息表明:该抗体识别的抗原性质不明,属国际上尚未认识的血细胞膜新的分化抗原(新的CD分子)。因此,对其识别抗原编码基因克隆与测序及其生物学功能研究有着重要的科学意义和潜在的应用前景。 1 直标鼠抗人新单抗ZCH-288a-FITC的研制及鉴定 为了深入研究ZCH-2B8a抗体识别抗原的表达谱及生物学功能,有利于利用流式细胞仪作多色分析和抗原阻滞试验,减少实验误差,拟将该抗体研制成异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)直接标记的抗体2B8a-FITC。在清洁级BALB/c小鼠腹腔内注射1×10~6能分泌2BSa单抗(2B8aAb)的杂交瘤细胞,制备大量2B8aAb腹水。通过Econo-Pac蛋白A柱进行亲和层析,纯化2B8aAb,纯化后的2B8aAb经SDS-PAGE凝胶电泳检测,纯度高,达99%以上。采用改良Marsshall法,用FITC标记纯化的2B8aAb,多余FITC经PBS充分透析除去,用紫外分光光度计测定A495/A280比值为0.56,介于FITC荧光抗体的理想比值0.3～1.0之间。流式细胞术检测显示,直标单抗2B8a-FITC与间接标记法2B8a+GAM-FITC在Raji细胞上的反应峰型相似,虽然前者的平均荧光强度指数(MFI,98.61)略低于后者(106.89),但阳性反应率基本一致,分别为99.11%和99.00%,表明直标荧光抗体2B8a-FITC制备成功。
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