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目的:采用妊娠中期BALB/c小鼠作为动物模型,观察:①弓形虫感染妊娠中期小鼠后,是否影响孕鼠的健康和胎鼠的生长发育;②感染后孕鼠血清中绒毛膜促性腺激素、胎盘催乳素和雌三醇的含量是否受到影响;③感染后虫体是否侵入孕鼠胎盘组织,造成胎盘组织病理性损伤;④感染后是否影响胎盘细胞的凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL、TNF-α的表达。通过以上实验,从胎盘结构、功能和内分泌角度,来较系统地分析和推导弓形虫感染妊娠中期宿主出现不良妊娠的机制。方法:将40只妊娠中期小鼠随机分为感染组和正常对照组,每组20只。在妊娠第8天,感染组经腹腔无菌接种纯化的弓形虫速殖子悬液(100个速殖子/0.2mlPBS/只);正常对照组注射等量无菌PBS(0.01mol/L,pH=7.4)。观察孕鼠的健康状况,于妊娠第12、14、16、18天随机、分批取感染组和正常对照组孕鼠各5只,摘眼球取血,收集血清,颈椎脱臼处死,分离胎盘和胎鼠。①解剖显微镜下观察胎鼠存活情况,电子天平称量胎盘和胎鼠的重量,游标卡尺测量胎鼠的体长和尾长;②放射免疫分析法测定孕鼠血清中绒毛膜促性腺激素、胎盘催乳素和雌三醇的含量;③瑞姬氏染色观察腹腔液、羊水和胎盘组织中是否有弓形虫存在,苏木素-伊红(HE)染色观察胎盘组织的病理损伤情况;④流式细胞技术检测胎盘细胞凋亡率,分光光度法测定胎盘组织半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)酶的活性;⑤免疫组织化学法检测胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及TNF-α的表达量。结果:①正常对照组孕鼠无异常体征,随着妊娠天数的增加,胎盘重量先增后减,胎盘系数逐步降低,胎鼠重量、体长和尾长不断增加;感染组孕鼠随着妊娠天数的增加,体重逐渐降低,出现竖毛、倦怠、采食量减少等异常表现,并有流产现象,死胎和吸收胎明显增多。组内不同妊娠天数的比较,差异均有统计学意义(胎盘重量:F正常对照组=88.610、F感染组=21.906,胎鼠重量:F正常对照组=1695.874、F感染组=284.801,胎盘系数:F正常对照组=165.930、F感染组=100.011,胎鼠体长:F正常对照组=649.255、t感染组=5.391,胎鼠尾长:F正常对照组=503.761、t感染组=6.267;P<0.001);组间相同妊娠天数的比较,第12天的胎盘系数,第14、16天的胎盘、胎鼠重量和胎鼠尾长,第16天的胎鼠体长,感染组均低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②放射免疫测定显示:感染组和正常对照组孕鼠血清绒毛膜促性腺激素的含量均随着妊娠天数的增加而降低,但在妊娠第18天时,正常对照组有轻微的升高;胎盘催乳素和雌三醇的含量均随着妊娠天数的增加而升高,但在妊娠第18天时,感染组有轻微的降低。组内不同妊娠天数的比较,差异均有统计学意义(绒毛膜促性腺激素:F正常对照组=19.306、F感染组=57.620,胎盘催乳素:F正常对照组=17.449、F感染组=46.720,雌三醇:F正常对照组=239.546、F感染组=22.841;P<0.001);组间相同妊娠天数的比较,三种激素的含量感染组均低于正常对照组,但仅妊娠第16天和第18天的差异有统计学意义(P<0.05)。③瑞姬氏染色和HE染色显示:感染组孕鼠妊娠第12天的腹腔液、羊水和胎盘组织中均未见弓形虫,病理损伤不明显;妊娠第14天的腹腔液和羊水中可见弓形虫速殖子,但胎盘组织中未见虫体,可见淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞侵润,偶见凋亡小体;妊娠第16天的腹腔液和羊水中速殖子数目明显增多,并有假包囊,胎盘组织中也有速殖子,可见部分滋养细胞破坏,胎盘绒毛出现炎性改变;到妊娠第18天,虫体数目进一步增多,胎盘绒毛血管减少,滋养层细胞缩小,胞浆浓缩,核质致密,可见大量的凋亡小体。④细胞凋亡检测显示:感染组和正常对照组孕鼠胎盘细胞凋亡率及Caspase-3酶的活力单位均随着妊娠天数的增加而升高。组内不同妊娠天数的比较,差异均有统计学意义(细胞凋亡率:F正常对照组=114.333、F感染组=200.417,Caspase-3酶的活力单位:F正常对照组=14.940、F感染组=15.212;P<0.01);组间相同妊娠天数的比较,感染组孕鼠胎盘细胞凋亡率及酶活力单位均高于正常对照组,除妊娠第18天的胎盘Caspase-3酶活力单位外,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑤免疫组化检测显示:感染组和正常对照组孕鼠胎盘组织中的细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及TNF-α在胎盘绒毛和蜕膜中均有表达,以合体滋养细胞表达较多。感染组和正常对照组孕鼠Bax、Fas、FasL及TNF-α的表达量均随着妊娠天数的增加而增加,Bcl-2的表达量均随着妊娠天数的增加而减少。组内不同妊娠天数的比较,差异均有统计学意义(Bax:F正常对照组=387.316、F感染组=76.059,Bcl-2:F正常对照组=255.026、F感染组=552.733,Fas:F正常对照组=591.607、F感染组=1131.261,FasL:F正常对照组=82.598、F感染组=159.749,TNF-α:F正常对照组=74.774、F感染组=105.678;P=0.000);组间相同妊娠天数的比较,感染组孕鼠Bax、Fas、FasL及TNF-α的表达量均高于正常对照组,Bcl-2的表达量均低于正常对照组。除妊娠第12天的TNF-α,第14天和第16天的Bax和Bcl-2外,表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:①弓形虫感染妊娠中期小鼠,虫体可能先在腹腔中大量繁殖,再扩散至羊水和胎盘组织,经口感染和经血液传播致先天性弓形虫病的发生。②弓形虫感染妊娠中期小鼠,虫体侵入胎盘组织,可致胎盘绒毛血管减少,部分滋养细胞破坏,绒毛出现炎性病理改变,影响胎盘对胚胎所需营养物质的转运。③弓形虫感染妊娠中期小鼠,可致胎盘组织中的细胞凋亡相关蛋白Bax、Fas、FasL及TNF-α表达量增加,Bcl-2表达量减少,启动内、外源性的细胞凋亡途径,激活凋亡效应酶Caspase-3,使胎盘细胞凋亡增加,进而使滋养细胞浸润子宫蜕膜及子宫螺旋小动脉的能力下降,以致胎盘血管网形成不良和螺旋小动脉重铸过程受阻,致使胎盘低灌注、缺氧、缺血。④胎盘的完整性受到破坏,胎盘滋养层细胞发生炎性病理改变和大面积凋亡,可导致血清中绒毛膜促性腺激素、胎盘催乳素和雌三醇等胎盘激素合成量的降低。⑤胎盘组织对胚胎所需营养物质的转运功能受损,胎盘低灌注、缺氧、缺血以及胎盘激素合成量的降低,共同导致胎儿宫内发育迟缓、死产、流产等不良妊娠的发生。