鲁道夫对盲囊线虫核糖体DNA遗传标记的研究

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  鲁道夫对盲囊线虫属于蛔虫目异尖线虫科对盲囊属。它的成虫普遍寄生于鸬鹚的胃内,幼虫寄生于各种鱼类。Mattiucci等用多位点酶电泳技术对C.rudolphii研究,发现该线虫是由两个姊妹种组成的复合种(C.rudolphiiA和C.rudolphiiB)。   本研究以来自欧洲的C.rudolphii姊妹种为研究对象,通过PCR-SSCP和DNA序列分析技术对C.rudolphii姊妹种核糖体DNA(rDNA)的第一及第二内转录间隔区(ITS-1及ITS-2)的多态性进行了研究,并在此基础上建立了C.rudolphii姊妹种分类鉴定的特异PCR方法和RFLP方法,而且将它们用于我国青海湖对盲囊线虫的分类鉴定。   本研究从分子遗传学角度出发,通过对C.rudolphii姊妹种和对照C.septentrionalerDNA的ITS-1及ITS-2进行PCR扩增、PCR-SSCP分析及序列分析,以明确ITS-1及ITS-2是否可作为C.rudolphii分子分类的遗传标记。本实验证明C.rudolphii确为由两个种(C.rudolphiiA和C.rudolphiiB)组成的复合种,ITS-1及ITS-2可作为两个姊妹种的遗传标志。   根据已测得的C.rudolphii姊妹种(C.rudolphiiA和C.rudolphiiB)及C.septentrionale的rDNAITS-1及ITS-2核苷酸序列,设计、合成了针对C.rudolphiiA、C.rudolphiiB及C.septentrionale的特异性引物HFA(F)、HFA(R)、HFB(F)、HFS(F)。通过PCR条件优化和扩增后,它们均能特异地扩增出目的DNA片段。从而初步建立了鉴定C.rudolphii姊妹种的特异PCR方法。该方法特异性强、敏感度较高、重复性好,不仅可用于C.rudolphii姊妹种的分类鉴定,也可用于它们所导致的寄生虫病的诊断和流行病学调查。   用保守引物扩增C.rudolphii姊妹种和C.septentrionalerDNAITS-1片段并纯化,根据C.rudolphiiA、C.rudolphiiB和C.septentrionalerDNAITS-1序列,选用限制性内切酶MspⅠ和NsiⅠ酶切,酶切产物用琼脂糖凝胶电泳分析。
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