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MicroRNA(miRNA)是在真核细胞中发现的一种非编码的小分子RNA,平均有22个核糖核苷酸组成。MiRNA通过控制细胞内蛋白质的翻译,来调节植物、动物和人类的基因表达。而且,有研究表明,miRNA的异常表达通常与癌症的发生,肿瘤的形成有关。因而,检测组织或细胞中miRNA的表达水平可为生物医学研究和临床早期诊断提供有价值的信息。然而,miRNA序列短稳定性差,家族序列同源性高、在细胞内表达水平较低且对体外研究环境的要求也十分苛刻。因此,建立简单、灵敏的miRNA检测方法对miRNA研究,以及癌症或肿瘤的早期诊断具有重要意义。相比传统的有机荧光染料和半导体量子点等纳米荧光材料,金属纳米簇具有不易光漂白、生物兼容性好、发光波长及团簇尺寸可调、合成条件温和等优点。本论文中,我们合成了一种暗的DNA-银纳米簇。暗DNA-银纳米簇合成后荧光处于熄灭状态,荧光强度很低;当有富G序列靠近AgNCs时,可以激发暗DNA-AgNCs的荧光。利用暗银簇的这个特性,结合双链特异性核酸酶诱导的扩增(DSNSA)反应,我们建立了系列简单、快速检测miRNA的方法。(1)基于DNA-银纳米簇结合双链特异性核酸酶诱导的扩增荧光增强检测miRNA在这个实验中,我们设计了一个3’端被磷酸化的DNA probe,其中包含两部分序列,3’端与目标miRNA-let-7a互补杂交,5’端与暗AgNCs的B序列互补杂交。目标Let-7a能够引发后续的DSNSA扩增反应,释放出大量的短链DNA。然后,在TdT和dGTP作用下,在短链DNA的3’端被延伸引入富G序列。短链DNA可以与银簇的DNA序列杂交,拉近了富G序列与AgNCs的距离,AgNCs的荧光被激发。该方法对let-7a的检出限为89 fmol。该方法利用DNA-AgNCs作为荧光探针检测miRNA,无需荧光标记;设计简单;检测成本低,为miRNA的检测开辟了新的途径。(2)基于DNA-银纳米簇荧光探针结合双链特异性核酸酶诱导的扩增无标记灵敏检测miRNA在这个实验中,我们依旧采用DNA-AgNCs作为荧光探针。设计了一个发夹结构的DNA探针(HP)。当目标物miRNA-21存在时,miRNA-21与HP杂交,将HP的发夹结构打开,形成DNA-RNA杂交双链,加入双链特异性核酸酶(DSN),发生DSNSA扩增反应,释放出大量的能与暗的银纳米簇杂交,并且含有富G碱基的序列。加入暗AgNCs,与释放的序列杂交,拉近了富G碱基序列与暗AgNCs的距离,暗AgNCs的荧光被激发,发射强荧光。该方法的检出限为8.3 fmol的miRNA-21。该方法无需任何标记,设计更加简单,检测灵敏度更高。可实现miRNA快速、灵敏的检测。