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目的研究网膜素-1(Omentin-1)对结肠癌干细胞增殖、凋亡的影响,观察网膜素-1对结肠癌干细胞PI3K/Akt信号通路的影响以及与PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002之间是否存在协同作用,探讨网膜素-1作用于结肠癌干细胞的可能机制。方法1.采用间接免疫磁珠方法,从结肠癌细胞株SW480中分选出结肠癌干细胞,在无血清培养基中培养结肠癌干细胞。2.结肠癌干细胞鉴定:克隆球形成实验检测结肠癌干细胞成球情况、分化实验检测结肠癌干细胞分化情况、流式细胞仪检测结肠癌干细胞表面标志物CD133。3.CCK-8实验:(1)结肠癌干细胞分为对照组(不加网膜素-1及LY294002)、Omentin1组(加入1μg/ml网膜素-1)、Omentin2组(加入2μg/ml网膜素-1)、Omentin LY组(加入1μg/ml网膜素-1及50μM LY294002)、LY组(加入50μM LY294002),干预24小时后,检测细胞OD值;(2)分别检测Omentin-11 ug/ml干预细胞0h、1h、6h、24h、48h后细胞OD值。4.结肠癌干细胞分为对照组(不加网膜素-1及LY294002)、Omentin1组(加入1μg/ml网膜素-1)、Omentin2组(加入2μg/ml网膜素-1)、Omentin LY组(加入1μg/ml网膜素-1及50μM LY294002)、LY组(加入50μM LY294002),干预24小时后,流式细胞术检测不同组别细胞凋亡情况。5.结肠癌干细胞分为对照组(不加网膜素-1)、Omentin1组(加入1μg/ml网膜素-1)、Omentin2组(加入2μg/ml网膜素-1),干预24小时后,提取出细胞蛋白,用Western blot方法检测不同浓度Omentin-1干预后Akt、p Akt蛋白表达。结果1.结肠癌干细胞在无血清培养基中培养至第1天可见小的干细胞球形成,第5天可见明显干细胞球形成,第10天干细胞球进一步增大且变圆,呈悬浮生长;分化实验显示在含血清培养基培养至第9天干细胞球全部分化成为梭状的结肠癌SW480细胞,呈贴壁生长;流式细胞仪分析显示CD133+结肠癌干细胞含量达80.3%。2.Omentin1组、Omentin2组、Omentin LY组、LY组,OD值均较对照组下降,差异具有统计学意义(P<0.05);Omentin2组较Omentin1组的OD值更低,差异具有统计学意义(P<0.05);Omentin LY组OD值低于Omentin1组和LY组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.1μg/ml网膜素-1作用于结肠癌干细胞0h、1h、6h、24h、48h后,随干预时间增加,OD值呈逐渐下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.Omentin1组、Omentin2组、Omentin LY组、LY组,细胞凋亡率均较对照组上升,差异具有统计学意义(P<0.05);Omentin2组的凋亡率高于Omentin1组,差异具有统计学意义(P<0.05);Omentin LY组凋亡率高于Omentin1组和LY组,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.Western blot结果显示Omentin-1干预后p Akt/Akt蛋白表达下降,其中Omentin2组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.网膜素-1抑制结肠癌干细胞增殖,其作用呈浓度-时间依赖性。2.网膜素-1促进结肠癌干细胞凋亡,呈浓度依赖性。3.网膜素-1对结肠癌干细胞的作用机制可能与抑制Akt通路有关。4.网膜素-1与LY294002在抑制结肠癌干细胞增殖、促进其凋亡的过程中具有协同作用。