【摘 要】
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生物大分子是承载一切生命活动的功能性分子,生物大分子包括:核酸、蛋白质等,在遗传信息传递和细胞生化功能等方面发挥着重要作用。而除了了解其基础的结构和功能外,生物大分子的修饰研究也逐渐引起业界的关注。本文主要是对一种特殊的由异戊烯基为骨架的脂质修饰展开了研究。一方面,我们对香叶基化(两个异戊烯基)的t RNA的分子标记进行了探索。通过类似物策略合成了一系列香叶基焦磷酸衍生物,构建表达“写入”酶Sel
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生物大分子是承载一切生命活动的功能性分子,生物大分子包括:核酸、蛋白质等,在遗传信息传递和细胞生化功能等方面发挥着重要作用。而除了了解其基础的结构和功能外,生物大分子的修饰研究也逐渐引起业界的关注。本文主要是对一种特殊的由异戊烯基为骨架的脂质修饰展开了研究。一方面,我们对香叶基化(两个异戊烯基)的t RNA的分子标记进行了探索。通过类似物策略合成了一系列香叶基焦磷酸衍生物,构建表达“写入”酶Sel U,共孵育后通过引入荧光基团的探针,成功地证明香叶基焦磷酸底物(G5和G6)能成功被Sel U识别,共价地连接到t RNA中,另外,运用液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)将两种特殊修饰的焦磷酸(G2和G3)与Hela细胞共孵育后,抽提的总t RNA经完全水解为核苷后,对其转化效率的定性和定量分析也做了初步尝试。另一方面,我们开发了一种直接针对异戊烯基团的特异性标记技术,运用Selectfluor试剂或精心设计的4-苯基-3H-1,2,4-三唑啉-3,5(4H)-二酮(PTAD)试剂与异戊二烯化基衍生物发生[2,3]重排烯反应。在一系列条件优化基础上,我们将其运用到大肠杆菌的t RNA和牛血清白蛋白(BSA)标记研究当中。研究表明,Selectfluor试剂参与的[2,3]重排烯反应可用于异戊烯化t RNA的直接检测中;PTAD及其衍生物则可以应用于选择性地标记异戊烯化核酸或蛋白。总之,在本课题组前期研究基础下,我们证明采用间接的“香叶基焦磷酸类似物的合成”-“共孵育”–“生物正交标记实验”和直接的使用Selectfluor试剂和精心设计并合成的PTAD试剂参与的Ene连接反应均可对异戊烯化核酸和蛋白进行选择性标记并成功找到其标记位点。该工作为异戊烯化修饰的转录组学或蛋白组学研究打下坚实的基础。后续的研究目前正在实验室进行当中。
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