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植物分生组织的干细胞是植物形态建成、器官持续再生的关键。WUS/WOX家族成员在植物分生组织的干细胞中特异表达,在植物器官发育过程中以及细胞类型转变中发挥着重要作用。本研究以海岛棉“新海16”为材料,克隆WOX/WUS转录因子家族的成员中与植物胚胎发育相关的基因GbWOX9,并对其进行结构预测分析、亚细胞定位预测、同源进化分析及不同体细胞胚阶段的表达分析,同时,构建化学诱导型的GbWOX9正、反义植物表达载体,借助农杆菌介导的遗传转化方法将GbWOX9基因导入到“新海16”的正、反义胚性细胞中并对其在不同诱导剂浓度处理过的细胞组织的表达模式进行分析。主要研究结果如下:1.利用PCR技术对GbWOX9基因进行克隆,借助相关的在线软件及DANMAN、MEGA5等对该基因进行生物信息学分析,结果表明该基因包括1038 bp的开放阅读框,编码345个氨基酸,在线预测其蛋白分子量约为38.26 kD,等电点为6.7。通过氨基酸序列比对发现,序列中含有一个保守的由65个氨基酸组成的DNA结合域,即同源异型结构域。系统进化树分析结果表明海岛棉GbWOX9蛋白与亚洲棉GaWOX9蛋白分布在同一分支上,说明二者在进化上亲缘关系较近。亚细胞定位预测GbWOX9可能定位于细胞核。qRT-PCR表明,该基因在“新海16”体细胞胚阶段的球形胚中表达量最高。2.构建了诱导型的正、反义植物表达载体pTA7002-GbWOX9和Anti pTA7002-GbWOX9,并进行了农杆菌遗传转化体系的优化研究。结果表明,对胚性细胞进行10 d的预培养OD600≈0.50.6,侵染时间为15 min,共培养24 h,抗性培养基中头孢和潮霉素的浓度分别为500 mg·L-1和20 mg·L-1时为转化效果较好。在加有抗生素的培养基上继代筛选两次以后,得到了转基因的阳性细胞。3.提取转化成功的海岛棉“新海16”正、反义植物表达载体胚性细胞的总RNA,利用荧光定量PCR检测GbWOX9的表达量。试验结果表明正、反义链的胚性细胞在30μmol·L-1的DEX浓度诱导之后,GbWOX9表达量皆与没有地塞米松诱导的对照之间有极显著差异(P<0.01)。