GbWOX9基因植物表达载体的构建及对海岛棉胚性细胞的遗传转化

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qwaszxzx
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物分生组织的干细胞是植物形态建成、器官持续再生的关键。WUS/WOX家族成员在植物分生组织的干细胞中特异表达,在植物器官发育过程中以及细胞类型转变中发挥着重要作用。本研究以海岛棉“新海16”为材料,克隆WOX/WUS转录因子家族的成员中与植物胚胎发育相关的基因GbWOX9,并对其进行结构预测分析、亚细胞定位预测、同源进化分析及不同体细胞胚阶段的表达分析,同时,构建化学诱导型的GbWOX9正、反义植物表达载体,借助农杆菌介导的遗传转化方法将GbWOX9基因导入到“新海16”的正、反义胚性细胞中并对其在不同诱导剂浓度处理过的细胞组织的表达模式进行分析。主要研究结果如下:1.利用PCR技术对GbWOX9基因进行克隆,借助相关的在线软件及DANMAN、MEGA5等对该基因进行生物信息学分析,结果表明该基因包括1038 bp的开放阅读框,编码345个氨基酸,在线预测其蛋白分子量约为38.26 kD,等电点为6.7。通过氨基酸序列比对发现,序列中含有一个保守的由65个氨基酸组成的DNA结合域,即同源异型结构域。系统进化树分析结果表明海岛棉GbWOX9蛋白与亚洲棉GaWOX9蛋白分布在同一分支上,说明二者在进化上亲缘关系较近。亚细胞定位预测GbWOX9可能定位于细胞核。qRT-PCR表明,该基因在“新海16”体细胞胚阶段的球形胚中表达量最高。2.构建了诱导型的正、反义植物表达载体pTA7002-GbWOX9和Anti pTA7002-GbWOX9,并进行了农杆菌遗传转化体系的优化研究。结果表明,对胚性细胞进行10 d的预培养OD600≈0.50.6,侵染时间为15 min,共培养24 h,抗性培养基中头孢和潮霉素的浓度分别为500 mg·L-1和20 mg·L-1时为转化效果较好。在加有抗生素的培养基上继代筛选两次以后,得到了转基因的阳性细胞。3.提取转化成功的海岛棉“新海16”正、反义植物表达载体胚性细胞的总RNA,利用荧光定量PCR检测GbWOX9的表达量。试验结果表明正、反义链的胚性细胞在30μmol·L-1的DEX浓度诱导之后,GbWOX9表达量皆与没有地塞米松诱导的对照之间有极显著差异(P<0.01)。
其他文献
“改进生活习惯”是高血压病的基础治疗,贵在坚持。滋肾柔肝法治疗老年人Ⅰ期,Ⅱ期高血压疗效比对照组优。对Ⅲ期降压效果两组不明显。改善临床症状实验组与对照组有显著性差异
爱国,这是中国优秀传统道德的价值核心,是中华民族自强不息的精神动力,是深深植根于人们心中的朴素、高尚、神圣的情感。这种爱国思想,表现为对祖国大好河山和历史文化的热爱,强烈
报纸
本文运用了运动训练学和运动生理学的相关理论,通过笔者亲身实验,选取12至14岁中学生96名,以成套安塞腰鼓12个动作作为练习内容,将实验对象随机分为实验组和对照组,每组男、
采用切环法和盲孔法测试了规格均为1 219mm&#215;22.0mm的X80钢级螺旋缝埋弧焊管(SAWH焊管)和直缝埋弧焊管中UOE焊管和JCOE焊管的残余应力,并进行了对比分析。结果表明:切
香港和新加坡的经济多年来持续高速增长,以“亚洲小龙”和“亚洲双城”著称。在1970年以后的20年间,香港和新加坡的年均GDP分别增长了8.3%和7.65%。在80年代,新加坡的边际资本产出率是香港的两倍。这
期刊
基于2013—2016年在吉林省永吉县、九台区、梨树县和前郭县开展的40组田间试验,通过研究稻谷产量、养分吸收量、肥料利用效率及养分平衡等指标,比较了测土配方(ST)与NE养分专家
竞争加大了赢得新客户的难度和成本,使越来越多的企业转向保持老客户。把重点放在获利较为丰厚的客户群上,即使不在新客户上投资,企业也能够实现大部分的盈利目标。因此,客户
基层城镇化创新实践是新型城镇化的重要内容,“新生小城市”是由“经济发达镇”转型发展而成的一大重要基层城镇化形态。随着“镇转城”的进展,“新生小城市”的管理体制展开
夜班护士的自我保健解放军324中心医院达川分院(635000)汪正英熬夜会损害身体健康,尤其是青年人,因为人体内的肾上腺皮质激素,是在黎明前分泌,具有促进人体糖类的代谢,保障肌肉发育的功能;一天
随着纳米材料的快速发展和广泛应用,对纳米力学的研究引起了越来越多科研工作者的关注。在微纳米尺度下,结构尺寸与材料分子尺寸已相当接近,尺度效应不可忽略,而经典的弹性理