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研究背景胰腺癌具有早期诊断困难、恶性程度高的特点,是预后最差的消化道恶性肿瘤之一,约80%的患者在确诊时已处于局部进展期或发生远处转移,从而失去直接手术根治的机会,即便在能够接受手术治疗的患者中其术后复发或转移的风险很高。胰腺癌的手术切除率低及复发率高的特点决定化疗是胰腺癌治疗的主要手段之一。目前吉西他滨(gemicitabine,GEM)是胰腺癌化疗的一线用药,但临床上约80%患者可出现对吉西他滨耐药,从而导致肿瘤复发,因此化疗耐药是影响胰腺癌患者预后和生存的关键因素之一。大量研究表明microRNA在多种恶性肿瘤的复发、转移和化疗耐药中发挥重要作用。目前国内外学者筛选耐药相关的microRNA主要基于耐药株细胞系或细胞系的肿瘤细胞异种移植瘤(cell-line-derived tumor xenograft,CDTX)模型,这种模型并不能真实反应肿瘤患者的化疗敏感性,这意味着基于CDTX模型筛选耐药相关microRNA的研究结果的临床转化价值有限。人源性肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDTX)模型可以保留原代肿瘤的特征,并在各个传代中保持稳定,从而克服了上述缺点。本研究的创新点在于目前尚无利用PDTX模型筛选胰腺癌化疗耐药相关microRNAs 的报道。因此,本研究利用课题组前期已建立胰腺癌PDTX小鼠模型进行药效学实验,从中筛选出吉西他滨耐药相关microRNA,并通过分析microRNA与临床病理参数的关系评价其临床价值。研究目的1.利用小鼠构建胰腺癌PDTX模型并筛选出胰腺癌吉西他滨化疗耐药相关的microRNA;2.预测microRNA的靶基因;3.检测microRNA在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达水平差异,结合相应的临床参数与病理参数,评估其是否具有临床价值。研究方法1.利用胰腺癌PDTX模型进行药效学试验,筛选出化疗耐药相关microRNA,并使用 qRT-PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction)进行验证;2.利用生物信息学方法预测胰腺癌化疗耐药相关的microRNA的可能靶点;3.采用RNA原位杂交技术检测胰腺癌组织和癌旁组织中microRNA的表达水平,应用χ2检验分析microRNA的表达与临床和病理参数之间是否具有关联性,应用单因素和多因素生存分析评估microRNA有无预测胰腺癌预后的价值。研究结果1.miR-135a-5p在吉西他滨耐药组中的表达水平显著高于敏感组;2.通过生物信息学方法结合文献预测miR-135a-5p的潜在靶点之一是FAK(PTK2);3.通过 qRT-PCR 验证在 AsPC-1、BxPC-3、MiaPaCa-2 和 PANC-1 等 4 种细胞株种,miR-135a-5p在AsPC-1细胞株中的表达水平最高,在PANC-1细胞株中的表达水平最低。4.与癌旁正常组织相比,miR-135a-5p在胰腺导管腺癌组织中呈高表达;miR-135a-5p表达水平是胰腺癌患者预后不良的独立危险因素,miR-135a-5p高表达与胰腺癌患者及术后接受吉西他滨化疗患者的预后不良相关。结论1.miR-135a-5p与胰腺癌吉西他滨耐药相关;2.miR-135a-5p的潜在靶点之一是FAK;3.miR-135a-5p在AsPC-1细胞株中的表达水平较高,在PANC-1细胞株中的表达水平最低;4.miR-135a-5p表达水平与胰腺癌患者及术后接受吉西他滨化疗的患者的临床预后显著相关,其高表达与胰腺癌患者预后不良及术后接受吉西他滨化疗的患者预后不良相关。