研究背景 大肠癌是最为常见的消化道恶性肿瘤之一。近三十年来，它的发病率和死亡率有逐年升高的趋势。大肠癌的发生、发展是由多因素引起、多基因参与并经历了多阶段的演变过程，是遗传因素与环境因素共同作用的结果。 FHIT基因是Ohta于1996年发现的一个抑癌基因，位于人类染色体的3p14.2区，跨越染色体上最常见的脆弱位点FRA3B，它是迄今为止在肿瘤细胞中最容易发生变异的基因；已有的研究认为FHIT基因是环境致癌物作用的靶分子。 为了明确FHIT基因在大肠癌发生、发展过程的作用机制，特别是FHIT基因在化学物致大肠癌中的mRNA转录和蛋白表达的变化规律，本研究选择了二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌为研究对象，采用免疫组织化学技术、巢式RT-PCR技术以及DNA测序等方法，对FHIT基因在成癌过程的变化规律进行研究。全文分为三部分： 第一部分 二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌动物模型的建立 目的：建立以二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌的动物模型，并观察大肠粘膜隐窝细胞在成癌过程中的增殖／凋亡变化。方法：常规剂量(20mg／kg体重)皮下注射二甲肼诱导大鼠大肠癌，分诱癌中期(第10周末)和末期(第25周末)处死动物观察成瘤率；分别以BrdU标记细胞免疫组化方法和TUNEL法检测大肠粘膜隐窝细胞的增殖／凋亡变化。结果：(1)诱癌中期大肠腺瘤成瘤率为74.2％(23／31)，无癌生成；(2)诱癌末期大肠癌成瘤率为87.1％(27／31)；(3)诱癌组大鼠大肠隐窝细胞的增殖／凋亡指数之比显著高于对照组。结论：成功建立了二甲肼诱导Wistar大鼠大肠癌动物模型，诱癌率达87.1％，并观察到了正常大肠粘膜到腺瘤，最终到癌的演变过程；大肠粘膜隐窝细胞的增殖／凋亡指数比值与大肠癌的发生率之间有非常好的相关性，可以有效地评价大肠癌的发生。 第二部分 FHIT基因在DMH诱导的大鼠大肠癌中转录异常的实验研究 目的：研究FHIT基因在二甲肼诱导大鼠大肠癌过程中mRNA异常转录变化。方法：应用巢式RT-PCR技术及DNA直接测序方法，对二甲肼诱导的大鼠大肠癌、大肠腺瘤复旦大学博士论文中文摘要以及正常大肠粘膜组织进行FHIT基因cDNA检测。结果:大肠腺瘤中FHIT基因的异常转.录本检出率为21.4%(3/14)，大肠癌中FHIT基因的异常转录本检出率为52.4%(22/42);DNA测序发现FHIT基因的异常转录本是由于核普酸片段的缺失和插入突变引起的;Wistar大鼠FH工T基因序列与GenBank中的序列存在两个碱基的差异。结论:FHIT基因的异常转录与二甲脱诱导大鼠大肠癌的发生、发展有关;首次发现大鼠FHIT基因异常转录本中存在插入突变;发现一条新的中国种WIStar大鼠的FHIT基因序列。第三部分FHIT基因在DMH诱导的大鼠大肠癌中蛋白表达异常的实验研究目的::研究Fhit蛋白在DMH诱导的大鼠大肠癌中的异常表达变化。方法:应用构椽酸一微波一链酶卵白素一过氧化物酶免疫组织化学方法，检测二甲腆诱导的大鼠大肠癌癌、大肠腺瘤以及正常大肠粘膜组织中Fhit蛋白的表达情况。结果:Fhit蛋白在正常大肠粘膜组织中均呈强阳性表达，在14.3%(3/21)大肠腺瘤中呈低表达，在47.6%(20/42)大肠癌中失表达，在23.8%(10/42)大肠癌中低表达。结论:Fhit蛋白低表达或失表达与二甲脱诱导大鼠大肠癌发生、发展存在一定联系;检测Fhit蛋白表达可以在一定程度上反映大肠癌的发生、发展进程。