论文部分内容阅读
目的:邻苯二甲酸二正辛酯(di-n-octy1 phthalate,DNOP)是一种常见的塑化剂,其具有良好的可塑性,因此广泛应用于塑料制品中。塑料包装产品中DNOP的急性毒性比较低,人体在一定剂量的摄入后往往没有急性表现,但其慢性毒性对人类的危害较大,研究发现:DNOP可通过氧化应激途径引起胰岛素抵抗,进而引发Ⅱ型糖尿病。吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline-quinone,PQQ)是人体中一种必不可少的生理调节剂,文献表明PQQ对由细胞氧化应激引发的疾病具有一定的治疗效果。酒精是生活中常见的物质,其应用范围十分广泛,在白酒中有大量的酒精成分,其毒性与细胞氧化应激有关。近期,我国著名品牌白酒中发现了塑化剂,更提高了人们对酒精与DNOP联合作用的关注程度。本课题选取大鼠胰岛β细胞Ins-1为研究对象,研究DNOP对胰岛β细胞Ins-1的毒性机制,并研究PQQ对Ins-1细胞的保护作用及酒精与DNOP的联合作用。方法:本课题选取大鼠胰岛β细胞Ins-1为研究对象,首先使用MTT毒性试验测定不同浓度DNOP对Ins-1细胞的毒性作用,并确定其半数致死量。使用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)检测DNOP对大鼠胰岛β细胞Ins-1DNA的损伤作用及PQQ对Ins-1细胞DNA的保护作用,酒精的联合作用。为得出DNOP对Ins-1细胞DNA损伤的相关机制及PQQ的保护作用,酒精的联合作用,使用苯二醛(OPT)检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,使用吖啶橙(AO)检测细胞内溶酶体膜稳定性,使用2’,7’-二氢二氯荧光素(DCFH)来检测细胞内活性氧(ROS),使用罗丹明123(Rhodamine 123)检测细胞内线粒体膜电位水平。得出Ins-1细胞的还原型谷胱甘肽(GSH)水平,溶酶体稳定性水平,细胞内活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位水平。在预处理试验中加入PQQ作为保护剂,观察各项指标。加入酒精与DNOP,观察DNOP与酒精的作用结果。试验结果使用SPSS17.0统计软件对试验数据进行统计学分析。结果:在SCGE试验中,DNOP单独处理胰岛β细胞Ins-1后,使Ins-1细胞的DNA链出现断裂损伤并呈剂量依赖关系。随着DNOP剂量增加,拖尾现象逐渐增强,尾长、尾距及尾DNA/头DNA(%)与对照组相比差异具有显著性;在PQQ预处理组中,胰岛β细胞Ins-1的拖尾现象减弱,尾长、尾DNA/头DNA(%)、尾距均小于同剂量DNOP单独处理组;在酒精预处理组中,胰岛β细胞Ins-1的拖尾现象更强,细胞的尾长、尾DNA/头DNA(%)、尾距相对于DNOP单独处理组明显增强。在细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)试验中,DNOP使Ins-1细胞的GSH水平降低;PQQ预处理组的GSH水平升高;相对于DNOP单独处理组,酒精预处理组的GSH水平相对于同浓度DNOP单独处理组降低。在细胞内溶酶体膜稳定性试验中,DNOP单独处理组的溶酶体膜稳定性降低,PQQ预处理组的溶酶体膜稳定性升高,酒精预处理组中的溶酶体膜稳定性相对于同浓度DNOP单独处理组有所降低。在细胞内活性氧(ROS)试验中,DNOP处理组的细胞内ROS水平升高,PQQ预处理组的细胞内ROS水平有所降低,而酒精预处理组的细胞内ROS水平相对于同浓度DNOP处理组有所升高。在细胞内线粒体膜电位测定试验中,DNOP处理组细胞内线粒体膜电位水平随浓度增加而降低,PQQ预处理组的线粒体膜电位水平升高,而酒精预处理组的线粒体膜电位水平有所降低。结论:在DNOP引起Ins-1细胞DNA损伤的氧化应激途径中,DNOP可使细胞的ROS水平升高,GSH水平降低,从而对细胞产生氧化应激损伤,PQQ可减少细胞内ROS的数量,提高细胞的GSH水平,减少细胞氧化应激的损伤,酒精可加重DNOP对Ins-1细胞的氧化应激损伤。在DNOP引起Ins-1细胞DNA损伤的溶酶体—线粒体途径中,DNOP可使Ins-1细胞的溶酶体膜稳定性降低,并使细胞线粒体膜电位水平降低,PQQ可使Ins-1细胞的溶酶体膜稳定性升高,线粒体膜电位水平上升,而酒精可使DNOP对溶酶体膜稳定性及线粒体膜电位降低,从而加重DNOP对Ins-1细胞DNA的损伤作用。综上所述,DNOP可通过氧化应激途径及溶酶体—线粒体途径损伤Ins-1细胞的DNA,PQQ具有保护作用,酒精具有联合作用。