芋螺毒素(Conotoxin,CTX)是从热带海洋肉食性软体动物芋螺(Conus)中得到的一类具有生物学活性的小分子肽类毒素,是芋螺进行捕食的主要工具。ω-芋螺毒素(ω-CTX)是电压敏感型钙离子通道(voltage sensitive calcium channel,VSCC)特异性阻断剂,中毒者往往出现肢体麻木、瘫痪等症状,严重的可导致死亡。目前还没有简单有效的检测方法。本研究获得了抗芋螺毒素的基因工程单链抗体,建立了一种基于基因工程单链抗体的检测芋螺毒素的方法,以便最终快速有效地检测海产品中芋螺毒素的含量。ω-芋螺毒素为小分子肽类毒素,仅由24-29个氨基酸组成,为半抗原。若直接以其进行动物免疫,无法产生免疫效果。成功构建了芋螺毒素与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)的重组蛋白,作为小鼠免疫用抗原;同时还构建了芋螺毒素与硫氧还蛋白(TRX)的重组蛋白,作为检测用抗原。重组蛋白经过表达纯化后检测蛋白浓度,GST-CTX的浓度为0.42 mg/mL,TRX-CTX的浓度为0.24 mg/mL。经过四次免疫后,测小鼠血清中抗芋螺毒素抗体的效价。血清效价最终达到了32000,处死后提取脾脏总RNA。通过RT-PCR获得cDNA第一链。以此链为模板,经PCR得到抗体重链可变区和轻链可变区基因(VH,VL),以编码(Gly4Ser)3的核苷酸序列作为linker,通过交错延伸PCR将VH和VL基因组装为完整的scFv基因。条带位置在750 bp左右。将scFv基因克隆入噬菌体载体pCANTAB-5E中,构建了噬菌体单链抗体库。经过计算初始的文库大约为4.8×106 cfu/mL。经过七轮的富集淘选,最终从噬菌体抗体库中筛选到一株亲和力较高的单链抗体。