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目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对体外AML(非M3)患者骨髓细胞凋亡的作用及其机制,从而为临床应用新药物新方法治疗AML提供实验依据。方法:1.形态学方法:在高倍显微镜下观察经瑞氏-姬姆萨染色的不同浓度梯度(0,0.5,1.0,2.0μmol/l)作用于AML(非M3)患者(以下简称AML患者)骨髓细胞不同时间(24h,48h,72h)后,细胞形态学的变化。2.采用流式细胞仪检测不同浓度梯度As2O3体外对AML患者骨髓细胞作用72h后的细胞凋亡率。3.采用巢氏甲基特异性PCR法(nested-methylation specific PCR,n-MSP)检测p16基因甲基化状态,RT-PCR法检测p16基因mRNA的表达水平。结果:1.形态学的观察:As2O3诱导AML患者骨髓细胞于24小时出现核膜皱缩,部分胞浆内可见空泡变性,48小时达到凋亡高峰出现凋亡小体。2.流式结果经统计处理结果:AnnexinⅤ/PI标记法观察发现,As2O3有促进AML患者骨髓细胞凋亡的作用。体外As2O3作用于AML组、正常人组72h后,随着As2O3浓度的增加,AML患者和正常人组骨髓细胞的凋亡率都逐渐增高,各不同剂量组之间有显著性差异(P<0.05);在相同药物浓度下,As2O3对AML患者组的凋亡效应与正常人组之间也存在显著性差异(P<0.05)。3. n-MSP法:As2O3诱导AML患者骨髓细胞随浓度的增加p16基因甲基化状态明显减弱甚至消失;RT-PCR法:As2O3诱导AML患者骨髓细胞随浓度的增加p16基因表达增强,不同浓度组间相比,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1. As2O3能够使AML(非M3)患者骨髓细胞中失活p16基因去甲基化而重新表达。2. As2O3能够诱导AML(非M3)患者骨髓细胞凋亡,并呈剂量依赖性。