论文部分内容阅读
目的：通过建立SD (Sprague-Dawley)大鼠哮喘模型,采用免疫组化法和RT-PCR的方法,检测哮喘大鼠肺组织中趋化素样因子1(CKLF1)的表达水平,探讨CKLF1在哮喘发病中的表达变化以及咳喘宁对其的影响。方法：50只清洁级健康雄性SD大鼠,根据随机分配原则,将其按体重编号,采用随机数字表法分为正常组(A组)和造模组；造模组以卵白蛋白(OVA)为过敏原、氢氧化铝为佐剂致敏SD大鼠,并连续2周予OVA雾化吸入激发制备哮喘大鼠模型。大鼠造模成功后,分为模型组(B组)、布地奈德组(C组)和咳喘宁组(D组)。模型组予生理盐水雾化吸入,各治疗组分别给予相应药物雾化吸入,连续用药7天,观察整个实验过程中各组动物的一般情况。末次用药24小时内处死大鼠,采集标本,左肺行支气管肺泡灌洗后细胞计数、分类计数；右肺组织用于观察肺组织病理变化；同时行免疫组化观察肺组织CKLF1蛋白表达,RT-PCR法检测肺组织中CKLF1的基因表达。结果：1.大鼠激发的表现：大鼠激发后表现为易激惹、烦躁、不断搔抓颜面部皮毛等过敏症状,呼吸加快加深,喘息,口鼻轻度发绀,腹部抽动,激发期间活动明显减少、俯伏不动,反复激发后大鼠精神差,反应不灵敏,毛色偏黄无光泽。2.各组大鼠支气管肺泡灌洗液的细胞计数及分类计数：模型组BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数及EOS均升高(P<0.05)；咳喘宁组与模型组比较, BALF中白细胞总数、淋巴细胞数、EOS均降低(P<0.05)；咳喘宁组与布地奈德组比较,BALF中各细胞数无明显差异(P>0.05)。3.各组大鼠肺组织病理变化：正常组无明显炎症改变。模型组呈显著炎性变化。布地奈德组与咳喘宁组均呈轻度炎症变化。4.各组大鼠肺组织CKLF1免疫组化表达：CKLF1在正常组大鼠肺组织呈弱阳性表达；模型组大鼠肺组织内CKLF1的表达明显较正常组增加；布地奈德组和咳喘宁组CKLF1表达明显强于正常组，弱于模型组；布地奈德组与咳喘宁组比较CKLF1表达无明显差异。5.各组大鼠肺组织CKLF1mRNA表达：模型组大鼠肺组织中CKLF1mRNA表达水平明显升高,与正常组比较差异显著(P<0.05)。布地奈德组和咳喘宁组CKLF1mRNA表达水平明显弱于模型组(P<0.05),咳喘宁组CKLF1mRNA表达水平与布地奈德组相近,无显著差异(P>0.05)。结论：咳喘宁能减轻哮喘大鼠肺组织的炎性反应；模型组大鼠肺组织中CKLF1的表达水平明显升高,咳喘宁治疗能降低CKLF1的表达。